[VIP第1年] 指数:3
而且基因组重排还能提高活性干酵母在生物乙醇生产中对干燥环境的抗逆性和乙醇发酵性能[46]，上海重组人源Claudin18.2蛋白质量放心可靠，以及酿酒酵母菌对木质纤维素水解产物中存在的***性副产物糠醛和乙酸的耐受性[47]。与此同时，采用电穿孔介导的DNA杂交技术对树干毕赤酵母菌(Pichiastipitis)和酿酒酵母菌进行的基因组重排，成功获得了可直接利用木糖来合成乙醇的杂交重组工程菌ScF2，上海重组人源Claudin18，上海重组人源Claudin18.2蛋白质量放心可靠.2蛋白质量放心可靠，并大幅提高了其木糖耐受性，为生物转化木质纤维素开发绿色能源创造了条件[48]。表2利用基因组重排提高微生物的各种生理特性Table2Genomeufflingivethephysiologicalcharacteristicsofmicrobes生理特性Physiologicalfeature亲本诱变Parentalmutagenesis微生物种属Species提升程度Increasedlevel葡萄糖耐受性GlucosetoleranceUV+NTG禾粟链霉菌Streptomycesgraminearus70%[11]耐热性ThermotoleranceUV+DES谷氨酸棒状杆菌Corynebacteriaglutamicum~16%[24]2-脱氧葡萄糖耐受性2-DeoxyglucosetoleranceUV+NTG+EB曲霉[29]5-羟甲基糠醛耐受性5-Hydroxymethyl-furfuraltoleranceNA酿酒酵aromycescerevisiae**[47]木糖耐受性XylosetoleranceNA毕赤酵母菌Pichiastipitis酿酒酵aromycescerevisiae[48]正丁醇耐受性n-ButanoltoleranceFluorescenc。
还需对其进行性能和遗传稳定性等多方面的综合评价及验证，**终才能获得预期的满足应用开发需要的工业改良菌种。图1基因组重排的技术流程概括Figure1Thegeneralcessofgenomeuffling图选项2基因组重排在微生物代谢产物开发上的应用基因组重排在微生物育种中**主要的应用就是提升代谢产物产量。表1对近5年来在涉及化工、食品、医药、生物能源等工业领域中应用基因组重排提升各类微生物代谢产物产量的主要实例进行了汇总，充分展示了该技术与传统诱变育种方法的相辅相成及多元化应用。以核糖体工程诱变为例，其特有的***筛选标记与基因组重排联用后相得益彰，在生物质能源丁醇和乙醇[12]，******多拉菌素[13]、阿维拉霉素[14]和诺西肽[15]，以及天然食品防腐剂ε-多聚赖氨酸(ε-PL)[16]等重要代谢产物的产量提升中得到了***应用。更为重要的是，基因组重排有效地规避了微生物基因工程改造所有的必需条件，对许多特殊种类或无法进行遗传操作的微生物而言，仍是***的菌种选育方法。比如在具有生物降解和环保功效的耐冷微生物约氏不动杆菌(Acobacterjohnsonii)中增强低温碱性脂肪酶的合成[17]，在红树林内生***琉球曲霉(Aspergillusluchuensis)中提高洛伐他汀的产量[18]。
依次包括下述步骤(1)按照GeneBank中人***个胞外区基因序列，采用RT-PCR常规方法，上游引入五②RI酶切位点，下游引入S"/1酶切位点获得***表位(即^83。.843表位氨基酸序列为QYIKANSKFIGITE，以引发体内较强的细胞免疫反应，从而促进**疫苗更好发挥作用)基因连接(TT83,3基因片段的5'末端为5fl附ffl，3'末端为五②RI)，插入pQE-30载体。连接产物转化感受态细胞DH5a，挑取单克隆培养过夜，提取质粒，经酶切鉴定获得预期大小的插入片段，进行测序；测序正确的质粒命名为，工程菌命名为pQE-30-rhHis-(2)重组蛋白表达挑取工程菌单菌落接种于5mLLB培养液(含Ampl00mg/L)中，37t摇床培养过夜，次日以l:100的比例转接到含Amp的LB培养液中，在37'C摇床培养3h至对数生长中期(OD6。。为)，加入终浓度为lmmol/L的IPTG，继续培养4h，离心收集菌体；表达产物的鉴定SDS-PAGE取30uL裂菌上清，加入30HL2X载样缓冲液，混匀。另取其他样品加入30"L水，混悬后再加入30uL2X载样缓冲液混匀。沸水中煮5min，12000rpm离心5min,取10uL上清加样于18%分离胶6%浓縮胶，上样后电压为60V约20min，样品进入分离胶后电压升至100V约4-5h，用R-250振荡染色2-3h，脱色直至背景清晰后制备干胶保存。
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