免疫印迹法(immunoblotting )因与Southern早先建立的检测核酸的印迹方法Southern
blot相类似,亦被称为Western blot。免疫印迹(western blotting)是在蛋白质电泳分离和抗原抗体检测的基础上发展起来一项检测蛋白质的技术。它将SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳的辨力与抗原抗体反应的特异性相结合。典型的印迹实验包括三个步骤①蛋白质的电泳分离;②将电泳后凝胶上的蛋白质转移至固体膜上,用非特异性,天津**白Western Blot免疫印迹服务,非反应活性分子封闭固体膜上未吸附蛋白质区域;③免疫学检测。免疫印迹克服了聚丙烯酰胺凝胶电泳后直接在凝胶上进行免疫学分析的弊端,天津**白Western Blot免疫印迹服务,极大地提高了其利用率,天津**白Western Blot免疫印迹服务、分辨率和灵敏度,使其成为使用**的免疫化学方法之一。
全自动单细胞western blot检测分析原理:全自动单细胞western blot分析是单细胞水平,蛋白质表达定量分析系统。系统采用**的微流控western blot芯片,通过单细胞微孔设计,采集单细胞,然后原位裂解细胞,释放蛋白,进行蛋白质电泳,将不同分子量蛋白进行分离,提高免疫学检测特异性。之后,采用**技术进行蛋白质原位捕获,使用western blot验证抗体及荧光标记二抗直接杂交,扫描仪进行芯片扫描后,分析软件对扫描结果进行深度定量分析。
收集蛋白样品(Protein sample preparation)
可以使用适当的裂解液,Western及IP细胞裂解液、RIPA裂解液等,裂解贴壁细胞、悬浮细胞或组织样品。对于某些特定的亚细胞组份蛋白,例如细胞**白、细胞浆蛋白、线粒体蛋白等,可以参考相关文献提取这些亚细胞组份蛋白,也可以使用试剂盒进行抽提。收集完蛋白样品后,为确保每个蛋白样品的上样量一致,需要测定每个蛋白样品的蛋白浓度。根据所使用的裂解液的不同,需要采用适当的蛋白浓度测定方法。因为不同的蛋白浓度测定方法对于一些去垢剂和还原剂等的兼容性差别很大。如果使用Western及IP细胞裂解液或RIPA裂解液,可以使用BCA蛋白浓度测定试剂盒
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