无论 Ct ***值是多少,任何能够有效扩增和检测起始模板拷贝数为 1 的系统都达到了灵敏度的极限。
如前文所述,效率是决定反应灵敏度的关键因素(图 5)。在检测极低拷贝数时的另一个重要的考虑因素是,不能预期模板为正态分布。相反,北京lncRNA荧光定量PCR课题承包,它会遵循泊松分布,该分布预测在平均包含一个拷贝的起始模板的大量重复中,北京lncRNA荧光定量PCR课题承包,实际上约 37% 不含拷贝,*有约 37% 含有 1 个拷贝,18% 应包含 2 个拷贝(见图 9),北京lncRNA荧光定量PCR课题承包。因此,为了可靠地检测低拷贝,必须做大量的重复实验来提供统计***性,以克服泊松分布的限制。
用于病原体检测:常规PCR不能定量,在操作中易污染导致出现假阳性结果,应用实时荧光定量PCR技术可以解决这些问题。此项技术已应用于检测丙肝***、宫颈*及其*前病变有关的人类**瘤***、抗结核******后定量检测病人痰样本病原体DNA含量,为疾病的诊断和***提供依据。用此项技术还可以一次性检测大量大肠杆菌样本,简便准确,是食品检面的一个突破
用于***选择和疗效判断:化疗过程中主要问题是病人对化疗***的耐药,检测**耐药基因的表达水平是选择化疗***的依据。检测微小残留病变的变化情况对于调整***策略和对病人进行个体化***非常重要
TaqMan探针法:TaqMan 探针法是具有高度特异性的定量 PCR 技术。它的工作原理是在 PCR 反应体系中存在一对 PCR 引物和一条探针,探针的5′ 端标记有报告基团,3′ 端标记有荧光淬灭基团,探针只与模板特异结合,其结合位点在两条引物之间。当探针完整的时候,报告基团的荧光能量被淬灭基团吸收,所以仪器搜集不到信号,随着反应的进展,Taq酶遇到探针,利用 3′→5′ 外切核酸酶的活性把探针切断,导致报告基团的荧光能量不能被淬灭基团吸收,产生了荧光信号,因此信号的强度就**了模板 DNA 的拷贝数
文章来源地址: http://nongye.m.chanpin818.com/nlmyxmhz/deta_3783830.html
免责声明: 本页面所展现的信息及其他相关推荐信息,均来源于其对应的用户,本网对此不承担任何保证责任。如涉及作品内容、 版权和其他问题,请及时与本网联系,我们将核实后进行删除,本网站对此声明具有最终解释权。