江苏多色荧光免疫组化染色服务 欢迎来电 上海朝瑞生物科技供应

    pH)漂洗5min×3/次，不时震荡(洗去多余游离的荧光素标记的抗体)。·缓冲甘油封片–分析纯无荧光的甘油9份+pH，江苏多色荧光免疫组化染色服务，。·镜检：在荧光显微镜下观察。·优点：方法简便、特异性高，非特异性荧光染色少。·缺点：敏感性偏低；而且每检查一种抗原就需要制备一种荧光抗体。若检测多种抗原需制备多种相应的荧光标记抗体，江苏多色荧光免疫组化染色服务。直接免疫荧光法的注意事项·对荧光标记的抗体的稀释：要保证抗体的蛋白有一定的浓度；·一般稀释度不应超过1:20，抗体浓度过低，会导致产生的荧光过弱，影响结果的观察。直接免疫荧光法的注意事项(续)·染色温度和时间需要根据各种不同的标本及抗原而变化；–染色时间：从10min到数小时，一般30min；–染色温度：多采用室温(25C)，高于37C可加强染色效果，但对不耐热的抗原(如流行性乙型脑炎***)可采用0-2C的低温，延长染色时间。–低温染色过夜较37C30min效果好的多，江苏多色荧光免疫组化染色服务。直接免疫荧光法的注意事项(续)·试验时需设置下列对照：–自发荧光对照(空白对照)：标本加，。–阳性对照：用已知的阳性标本加荧光标记的特异性抗体。–特异性对照(***试验)：标本加未标记的特异性抗体，再加荧光标记的特异性抗体。

    我身边有个研究生同学在我们实验室初次涉入免疫组化，听说步骤不难，跟我后面做了几次之后，就自己开始做了，连续做了三次，结果均是阴性染色。很扫兴，不知是什么原因导致的，后来我还是请教了上海舜田生物老师，她**提供给我我很大的帮助，解决问题的思路也逐步清晰。问题及其解答：免疫组化染色呈阴性结果的原因有哪些？1、抗体浓度和质量问题以及抗体来源选择错误。不知抗体是进口的还是国产的工作液，怎么这么高稀释度也没能做出阳性结果？另外，不是抗体浓度越高就越易出现阳性结果，抗原抗体反应有前带和后带效应，必须摸索比较好浓度。2、抗原修复不全，对于甲醛固定的组织必须用充分抗原修复来打开抗原表位，以利于与抗体结合；建议微波修复用高火4次*6min试试。有人做过实验，这是比较好的时间和次数。若不行，还可高压修复。3、组织切片本身这种抗原含量低；4、血清封闭时间过长。5、DAB孵育时间过短。6、细胞通透不全，抗体未能充分进入胞内参与反应。7、开始做免疫组化，我建议你一定要首先做个阳性对照片，排除抗体等外的方法问题。我的实际解决方案：1、首先，排除组织切片内的抗原有无丢失及其含量多少。免疫组化中两个**重要的因素是抗原和抗体。

    3、四甲基异硫氰酸罗丹明(TRITC)：该荧光素能与细胞内蛋白质结合，比FITC稳定性好，在生理条件下对pH值变化不敏感，荧光强度受自发荧光干扰小。比较大激发光波长为550nm；比较大发射光波长为620nm，呈橙红色荧光，与FITC发出的黄绿色荧光对比鲜明，常用于免疫荧光组织化学双重染色。4、花青类染料常用的有Cy3、Cy5等，能与细胞内蛋白质结合。这类染料的荧光特性与传统荧光素类似，但水溶性和对光稳定性较强，荧光量子产率较高，对pH等环境不敏感。常用于多重染色。5、乙酸甲酯其本身不发荧光，但透膜进入细胞质后，在酯酶的作用下转变为具有荧光特性的乙酸甲酯。其激发光谱有pH依赖性，是使用**多的细胞内pH荧光指示剂。比较大激发光波长为505nm，比较大发射光波长为530nm，呈绿色荧光。

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