温度设置:在设置荧光 PCR 程序时,要仔细核对程序中的目标温度、恒温时间和循环次数等参数,参数设置不正确将直接影响 PCR 检测结果。延伸过程中要设置读取收集荧光信号,如不设置收集荧光,将无法保存试验数据,无法判定检测结果,造成试验失败 操作规范:在对样品进行核酸提取和实时荧光扩增时要规范操作,防止样品的交叉污染、 酶的降解,江苏基因表达荧光定量PCR分析服务、假阳性的出现 离心管、***头和 PCR 管均需要高压灭菌或使用商品化的无 污染的离心管、***头和PCR 管。核酸提取结束后应立即进行仪器扩增,江苏基因表达荧光定量PCR分析服务,江苏基因表达荧光定量PCR分析服务,提取的核酸不可长时间置于室温,易受空气中酶的降解,短期可保存于 -20 ℃冰箱,长期应保存于-70 ℃冰箱
实时荧光定量PCR的应用
目前,qPCR技术已经广泛应用于生物医药食品等行业,应用于疾病的早期诊断、遗传病的早期诊断、***研究、**的诊断与研究、食品病原微生物的检测、转基因食品检测、动物疫病检测等,除此之外,还包括:
● 基因扩增
● 扩增特异性分析
● 基因定量分析
● 基因检测
● 基因分型
● SNP分析
● RFLP多态性分析
● 单/多基因表达研究
● 高通量基因表达谱研究
实时荧光定量PCR技术,顾名思义,就是在PCR的基础上加入荧光基团,通过荧光信号的变化的实时监测PCR的反应过程,***通过对未知模板进行定量分析的方法。
***定量:用已知的标准曲线对未知样本的量进行推算的方法为***定量法。此种方法需要明确标准样品的浓度情况,然后稀释标准样品,分为几个不同梯度浓度然后进行反应测试。横坐标为标准品拷贝数的对数值,纵坐标为测得的Ct值,进而绘制出标准曲线。以标准曲线为基础,在定量分析未知样品过程中根据其ct值能够将样起始拷贝数推算出
实时荧光定量PCR技术总结为以下几点。特异性强 灵敏度高 重复性好 检测速度快 自动化程度高
实时荧光定量PCR具有灵敏度高、特异性高和精确性高的优点,此项技术已被应用于分子生物学、医学、食品检测和环境监测等多个领域
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