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免疫组化细胞凋亡检测细胞凋亡原理：正常凋亡细胞通过检测凋亡细胞DNA片段进行染色，正常的、人为造成凋亡的细胞很少能够被染色。以甲基绿复染，便于从形态学上分辨评估正常细胞和凋亡细胞。首先确定目标凋亡细胞的组织部位（如眼球组织，由于玻璃体结构内没有细胞核，因此看不到凋亡，在整个组织的**外面有单层视网膜细胞，因此只能在**边缘查看凋亡细胞的阳性产物）免疫组化关于掉片HE、Masson、番红O、Nissl、Mallory等染色方法很少有掉片现象；免疫组化和细胞凋亡检测我们采用专门购买的防脱片，由于整个实验流程比较长，上海多标记免疫组化分析服务，在实验过程中产生掉片是很正常的现象。对于容易掉片的组织，上海多标记免疫组化分析服务，如：骨组织、脑组织、皮肤组织等掉片有时候是不可避免的。免疫组化经验总结编辑做过病理实验的人都知道，实验看似容易，但真想把它做好，上海多标记免疫组化分析服务，还是需要花上很长一段时间去积累和摸索经验。我从事病理实验已有6年多了，在这段时间里，我做过许许多多病理相关实验，刚开始啥也不懂，一味按照网上操作流程来做，但做的结果往往并不是十分理想，**终结果未能达到预期的效果。经过一段时间的浏览和学习，从一些在论坛内学习、请教，并结合实践操作，我经历了初级——查找资料和摸索方法。
免疫细胞化学技术抗原和抗体的要求·具有特异性高和亲和力强的抗体是实验成功的首要条件。–对抗体的要求：纯度高、比活性强；·高度特异性抗体的获得，取决于抗原的纯度。–对抗原的要求：纯度高，免疫原性强，稳定无变化。免疫细胞化学技术抗原(antigen,Ag)·抗原的概念：凡是在机体内引起体液免疫和(或)细胞免疫反应的物质，称为抗原。抗原具有两个方面的特性：–免疫原性：引起机体产生抗体和(或)致敏淋细胞的特性；–免疫反应性：抗原能与相应的抗体及致敏淋巴细胞发生特异的结合或反应的特性。·根据抗原是否显示免疫原性分为：–完全抗原：分子量较大，一般在10kDa以上，并具有较复杂的化学组成。·免疫原性**强的是蛋白质抗原，多糖次之；脂类和核酸必需和蛋白质及多糖形成复合物才具有良好的免疫原性。–半抗原：又称为不完全抗原，分子量较小。例如：某些短肽、多糖、类脂和***等。·半抗原必需与载体结合，才能获得免疫原性。载体·通常是具有高度免疫原性的大分子物质，具有将免疫原性传递给耦联的半抗原能力。–常用的载体有钥孔血蓝蛋白(keyholelimpethemocyanin，KLH)、牛血清白蛋白(bovineserumalbumin,BSA)、卵白蛋白(Ovalbumin，OVA)等。
在放入氨水中返兰即可。13）封片为了长期保存，我们一般用中性树胶等封片，避免产生气泡，方法是直接在载玻片组织上滴一滴封片液，然后一手拿住盖片某一拐角，而另一手拿对面的那个拐角，接近封片液近端的拐角先降低，直至接触到液体时为止；当发现液体接触面在不断弥散时，则可以缓慢降低另一拐角，这样一般不会产生气泡。2、免疫荧光方法中的重要环节1）冰冻切片制备建议用新鲜组织，否则组织细胞内部结构破坏，易使抗原弥散。选用干净锋利的刀片、组织一定要冷冻适度等，防止裂片和脱片严重。2）组织切片固定切好片风干后立即用冰**等固定液进行固定5-10min，尤其要较长时间保存的白片，一定要及时固定和适当保存。3）血清封闭为防止内源性非特异性蛋白抗原的结合，需要在一抗孵育前先用血清（与二抗来源一致）封闭，减弱背景着色。血清封闭的时间是可以调整的，一般10-30min。4）一抗孵育条件在免疫组化反应中**重要，包括孵育时间和抗体浓度。一抗孵育温度有几种：4℃、室温、37℃，其中4℃效果比较好；孵育时间：这与温度、抗体浓度有关，一般37℃1-2h，而4℃过夜和从冰箱拿出后37℃复温45min。具体条件还要摸索。5）二抗孵育条件二抗一般室温或37℃30min-1h。
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