[VIP第1年] 指数:3
多光谱成像技术多光谱成像技术，可俗称免疫荧光多标，即将我们常见的免疫荧光双标提高到六标，实现了在同一张组织切片上同时标记3~6种蛋白，解决了科研中经常遇到的标记蛋白种类太少，北京四色免疫组化实验服务，无法在同一张切片上观察不同细胞或者多种蛋白分布情况的难题。那么多光谱成像技术是什么工作原理，同时又具有哪些更加强大的功能？
多光谱成像技术由多标染色、图像采集和图像分析三大模块组成。多标染色采用的是Opal/TSA多标记免疫荧光技术，打破了常规免疫荧光技术的局限性，不受一抗的种属来源限制，能够在同一组织切片样本上复染多达7种荧光标记（含DAPI在内），北京四色免疫组化实验服务，北京四色免疫组化实验服务。图像采集采用了Vectra全光谱图像采集技术，这是***一代的组织切片成像分析系统，创新性的将光谱成像和切片全景扫描功能完美融合，实现了**性的技术跨越，通过光谱拆分能够去除自发荧光的干扰，有效识别多重荧光信号，从而获得***图像，确保能够进行精细的定量定位分析。
这方面我有惨痛教训，当时我买的抗体稀释液偏酸，结果背景一片黄（未见特异性染色），建议pH在。（中性及弱碱性条件（pH7-8）有利于免疫复合物的形成，而酸性条件则有利于分解；低离子强度有利于免疫复合物的形成，而高离子强度则有利于分解）9）拍照有条件的话比较好立即拍照，若不能及时拍照，也要封好片和用指甲油封固，保持避光和湿度。使用荧光显微镜注意严格按照荧光显微镜出厂说明书要求进行操作，不要随意改变程序；应在暗室中进行检查；防止紫外线对眼睛的损害，在调整光源时应戴上防护眼镜；检查时间每次以1~2h为宜，超过90min，超高压汞灯发光强度逐渐下降，荧光减弱；标本受紫外线照射3~5min后，荧光也明显减弱或褪色；激发光长时间的照射，会发生荧光的衰减和淬灭现象；所以**多不得超过2~3h；荧光显微镜光源寿命有限，标本应集中检查，以节省时间，保护光源。天热时，应加电扇散热降温，新换灯泡应从开始就记录使用时间。灯熄灭后欲再启用时，须待灯光充分冷却后才能点燃。***中应避免数次点燃光源。关闭汞灯至少在开启15-30分钟后；标本染色后立即观察，因时间久了荧光会逐渐减弱。若将标本放在聚乙烯塑料袋中4℃保存，可延缓荧光减弱时间，防止封裱剂蒸发。
6）滴加通用型IgG抗体-Fab段-HRP多聚体，室温/37℃孵育30分钟-1h，PBS/TBS冲洗，3分钟×5次。7）应用DAB溶液显色。8）蒸馏水冲洗、复染、脱水、透明、封片。三、免疫荧光技术（略）1、酶免疫组化的关键环节1）标本固定固定的目的是①防止标本从玻片上脱落；②除去妨碍抗原-抗体结合的类脂，使抗原抗体结合物易于获得良好的染色结果；③固定的标本易于保存。固定剂的选择一般用4%多聚甲醛，但睾丸组织、眼可能要选用Bouin’s液或mDF液效果较好。2）脱水、石蜡包埋和制片脱水用梯度乙醇（由低到高）充分脱水、对组织要完全浸蜡、切片时刀片要干净和锋利。否则，容易裂片和脱片等。3）脱蜡和水化这是为了后面的抗体等试剂能够充分与组织中抗原等结合反应。脱蜡可以先60℃20min，然后立即二甲苯1-3分别10min（这个时间是由二甲苯新鲜程度和室温等综合决定的），但当天制好的切片一般先60℃3-4h。水化用梯度乙醇（由高到低）。若脱蜡和水化不全易出现局灶性反应和浸洗不全，而产生非特异性背景着色。4）抗原修复由于组织中部分抗原在甲醛或多聚甲醛固定过程中，发生了蛋白之间交联及醛基的封闭作用，从而失去抗原性；通过抗原修复，使得细胞内抗原决定族重新暴露。
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