TaqMan探针法:TaqMan 探针法是具有高度特异性的定量 PCR 技术。它的工作原理是在 PCR 反应体系中存在一对 PCR 引物和一条探针,探针的5′ 端标记有报告基团,3′ 端标记有荧光淬灭基团,探针只与模板特异结合,其结合位点在两条引物之间。当探针完整的时候,报告基团的荧光能量被淬灭基团吸收,所以仪器搜集不到信号,天津MiRNA 荧光定量PCR实验技术服务,天津MiRNA 荧光定量PCR实验技术服务,随着反应的进展,天津MiRNA 荧光定量PCR实验技术服务,Taq酶遇到探针,利用 3′→5′ 外切核酸酶的活性把探针切断,导致报告基团的荧光能量不能被淬灭基团吸收,产生了荧光信号,因此信号的强度就**了模板 DNA 的拷贝数
SNP基因分型技术原理是PCR扩增含有SNP的基因组片段,主要特点是准确性高、灵活性强、通量大,主要方法是TaqMan探针法。TaqMan探针法 针对染色体上的不同SNP位点分别设计PCR引物和TaqMan探针,进行实时荧光PCR扩增。探针的5’-端和3’-端分别标记一个报告荧光基团和一个淬灭荧光基团。当溶液中存在PCR产物时,该探针与模板退火,即产生了适合于核酸外切酶活性的底物,从而将探针5’-端连接的荧光分子从探针上切割下来,破坏两荧光分子间的PRET,发出荧光。通常用于少量SNP位点分析。
荧光定量PCR技术是指在PCR反应体系中加入荧光基团,通过荧光信号不断累积而实现实时监测PCR全程,然后通过标准曲线对未知模板进行定量分析的方法。在实时荧光定量PCR中,对全程PCR扩增过程进行实时检测,根据反应时间和荧光信号的变化可以绘制成一条曲线
Ct值:C**Cycle,t**threshold,Ct值的含义是每个反应管内的荧光信号到达设定的域值时所经历的循环数
荧光背景信号阶段:在荧光背景信号阶段,扩增的荧光信号与背景无法区分,无法判断产物量的变化
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