[VIP第1年] 指数:3
所说的PCR应该就是**常规的PCR，以DNA为模板，通过上下游引物，实现DNA的扩增。
2、RT-PCR一般情况下是指反转录PCR（reverse transcription），尽管有些资料上说实时荧光定量PCR也（realtime fluores-cence quantitative PCR）也简称RT-PCR，但是这是不对的，不推荐。
基本操作过程是将所提取的RNA进行反转录，然后将所获得的cDNA作为模板，设计引物进行扩增，是一种检测基因表达的常用方法，江苏转基因荧光定量PCR技术服务，江苏转基因荧光定量PCR技术服务。
3、实时荧光定量PCR也就是Real-Time PCR，其比较大的作用是检测样品中的初始DNA浓度。
至于三者的关系，江苏转基因荧光定量PCR技术服务，RT-PCR和实时定量PCR应该都属于PCR，在RNA实验中，这二者都会应用到
管家基因反应体系： 序号 反应物 剂量 1 SYBR Green 1 染料 10μl 2 内参照上游引物F 0.5μl 3 内参照下游引物R 0.5μl 4 dNTP 0.5μl 5 Taq酶 1μl 6 待测样品cDNA 5μl 7 ddH2O 32.5μl 8 总体积 50μl 轻弹管底将溶液混合，6000rpm短暂离心。
制备好的阳性标准品和检测样本同时上机，反应条件为：93℃2分钟，然后93℃ 1分钟，55℃ 2分钟，共40个循环。 针对每一需要测量的基因，选择一确定表达该基因的cDNA模板进行PCR反应。
反应体系： 序号 反应物 剂量 1 10×PCR缓冲液 2.5 ul 2 MgCl2溶液 1.5 ul 3 上游引物F 0.5 ul 4 下游引物R 0.5 ul 5 dNTP混合液 3 ul 6 Taq聚合酶 1 ul 7 cDNA 1 ul 8 加水至总体积为 25ul 轻弹管底将溶液混合，6000rpm短暂离心。
35个PCR循环(94℃1分钟;55℃1分钟;72℃1分钟); 72℃延伸5分钟。
PCR产物与 DNA Ladder在2%琼脂糖凝胶电泳，溴化乙锭染色，检测PCR产物是否为单一特异性扩增条带。
将PCR产物进行10倍梯度稀释: 设定PCR产物浓度为1×1010，依次稀释至109、108、107、106、105、104几个浓度梯度。 所有cDNA样品分别配置实时定量 PCR反应体系。
Ct（阈值循环）是扩增曲线与阈值线的交叉点（图 1B）。它是 PCR 反应中靶标浓度的相对测量。除靶标浓度之外，还有很多因素会影响 Ct 的***值。我们将要讨论最常见的可能影响 Ct 值的非模板依赖性因素，并描述如何评估实时荧光定量 PCR 反应的性能。
显示实时反应扩增图的几个参数。图 1B 中的**期对应于图 1C 中的线性期。阈值必须设在扩增图的线性期中。Ct 值随模板量减少而增加。然而，反应混合物或仪器中的任何干扰，只要能影响与 Ct 计算相关的荧光测定，都会使 Ct 值产生非模板依赖性的变化。因此，在不同条件下或用不同试剂进行的 PCR 反应产生的 Ct 值不可以直接进行比较。
文章来源地址: http://nongye.m.chanpin818.com/nlmyxmhz/deta_3891027.html
免责声明： 本页面所展现的信息及其他相关推荐信息，均来源于其对应的用户，本网对此不承担任何保证责任。如涉及作品内容、 版权和其他问题，请及时与本网联系，我们将核实后进行删除，本网站对此声明具有最终解释权。