天津非编码RNA 荧光定量PCR分析服务 欢迎来电 上海朝瑞生物科技供应

TaqMan探针法：TaqMan 探针法是具有高度特异性的定量 PCR 技术。它的工作原理是在 PCR 反应体系中存在一对 PCR 引物和一条探针，探针的5′ 端标记有报告基团，天津非编码RNA 荧光定量PCR分析服务，3′ 端标记有荧光淬灭基团，探针只与模板特异结合，其结合位点在两条引物之间。当探针完整的时候，报告基团的荧光能量被淬灭基团吸收，所以仪器搜集不到信号，天津非编码RNA 荧光定量PCR分析服务，随着反应的进展，Taq酶遇到探针，天津非编码RNA 荧光定量PCR分析服务，利用 3′→5′ 外切核酸酶的活性把探针切断，导致报告基团的荧光能量不能被淬灭基团吸收，产生了荧光信号，因此信号的强度就**了模板 DNA 的拷贝数

荧光定量PCR 技术，是通过在PCR 反应体系中加入荧光基团，利用荧光信号的变化实时监测PCR 扩增反应中每一个循环扩增产物量的变化，对起始模板进行定量分析的方法。实验采用两种定量方式，即***定量和相对定量。荧光定量PCR 可用于mRNA 表达量水平检测、MicroRNA 表达量水平检测和基因拷贝数检测。实验的方法可分为SYBR Green I 法和TaqMan 探针法。

客户提供提供样本

细胞：细胞数>10^6；

组织：总量>100 mg；

DNA 或RNA 样品：总量>2 μg。

可选样本引物：可由客户提供，没有引物的情况下，可由生工生物设计合成

提供信息

靶基因信息：包括基因序列或GenBank Accession Number 等；背景资料：包括生物物种信息（Human、Mouse、Rat 等）、DNA/RNA 来源、基因丰度等。**终交付交付报告

实验报告：包括实验方法、步骤、所用试剂、仪器、照片及相关分析数据等。

混合液在加入逆转录酶MMLV 之前先70℃干浴3分钟，取出后立即冰水浴至管内外温度一致，然后加逆转录酶0.5μl，37℃水浴60分钟。

  取出后立即95℃干浴3分钟，得到逆转录终溶液即为cDNA溶液，保存于-80℃待用。 管家基因(β-actin)实时定量PCR

  β-actin阳性模板的标准梯度制备 阳性模板的浓度为1011，反应前取3μl按10倍稀释(加水27μl并充分混匀)为1010，依次稀释至109、108、107、106、105、104，以备用。

  反应体系如下：

  标准品反应体系 序号 反应物 剂量 1 SYBR Green 1 染料 10μl 2 阳性模板上游引物F 0.5μl 3 阳性模板下游引物R 0.5μl 4 dNTP 0.5μl 5 Taq酶 1μl 6 阳性模板DNA 5μl 7 ddH2O 32.5μl 8 总体积 50μl 轻弹管底将溶液混合，6000rpm短暂离心。

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