每个反应管内的荧光信号到达设定阈值时所经历的循环数。每个模板的Ct值与该模板的起始拷贝数的对数存在线性关系,起始拷贝数越多,Ct值越小。利用已知起始拷贝数的标准品可作出标准曲线,其中横坐标**起始拷贝数的对数,纵坐标**Ct值。因此,只要获得未知样品的Ct值,即可从标准曲线上计算出该样品的起始拷贝数。同时,对于荧光PCR实验来说,CT值也是判读样品阴阳性的重要指标。
大量的荧光定量PCR研究资料表明,病原体数量与***性疾病病情的轻重程度,北京基因表达荧光定量PCR技术服务、传染性及***效果均有相关性,北京基因表达荧光定量PCR技术服务。因此,北京基因表达荧光定量PCR技术服务,通过荧光定量PCR方法得到的检测结果,一定程度上可以准确反映疾病***的情况。
一个评估 PCR 效率的关键参数是 R2,它是说明如何使用一个数值预测另一个数值的相关程度的统计学术语。如果 R2 为 1,那么 Y 值 (Ct) 可以用来准确预测 X 值(图7A)。如果 R2 为 0,那么就不能通过 Y 值预测 X 值(图 7B)。R2 值 >0.99 表示两个数值之间相关的置信度良好。
精确度
标准差(偏差的平方根)是**常用的精确度计量方法。如果许多数据点都靠**均值,则标准差就小;如果许多数据点都远离平均值,则标准差就大。
实际上,足够多重复次数产生的数据**形成大致的正态分布。这经常可通过经典的中心极限定理来证明,该定理称大量**同分布随机变量的和在无限多时趋向于正态分布。如图 8A 所示,约 68% 的值在平均值的 1 个标准差之内,约 95% 的值在平均值的 2 个标准差之内,约 99.7% 的值在平均值的 3 个标准差之内。
***定量:用已知的标准曲线对未知样本的量进行推算的方法为***定量法。此种方法需要明确标准样品的浓度情况,然后稀释标准样品,分为几个不同梯度浓度然后进行反应测试。横坐标为标准品拷贝数的对数值,纵坐标为测得的Ct值,进而绘制出标准曲线。以标准曲线为基础,在定量分析未知样品过程中根据其ct值能够将样起始拷贝数推算出
实时荧光定量PCR技术总结为以下几点。特异性强 灵敏度高 重复性好 检测速度快 自动化程度高
实时荧光定量PCR具有灵敏度高、特异性高和精确性高的优点,此项技术已被应用于分子生物学、医学、食品检测和环境监测等多个领域
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