更重要的该文献还给出了如何规范定量PCR流程的checklist,其**目的就是在规范的实验流程、统一的设计思路下,得到的结果才具有可重复性,也具有可比性,北京正规数字PCR检测服务。但依赖于Cq值仍然是目前定量PCR比较大的技术瓶颈,北京正规数字PCR检测服务,北京正规数字PCR检测服务,在这个意义上所谓的“定量”也只是相对的。而且在低拷贝靶分子、模板浓度差异细微的条件下,其检测的灵敏度、精确度都受到了限制。1999年霍普金斯大学的Bert Vogelstein教授以 Digital PCR为题发表的文章被视为**早的采用数字PCR概念进行研究的文献。
DNase I footprinting是一种精确测定DNA结合蛋白在DNA分子上的结合位点的方法。凝胶阻滞实验(EMSA)和DNase I足迹分析实验是目前两种常用体外研究核酸与蛋白相互作用的方法,凝胶阻滞实验可以确定转录因子是否与DNA直接结合,而DNase I足迹分析实验则可以精确鉴定其结合的DNA序列,从而帮助我们研究基因转录调控的机制。本技术服务利用荧光标记法结合测序的方法来进行DNase I足迹分析实验。检测灵敏高,获得的保护区域清晰,图片的质量好。
定量PCR是依靠标准曲线或参照基因来测定核酸量,而数字PCR则让你能够直接数出DNA分子的个数,是对起始样品的***定量。因此特别适用于依靠Ct值不能很好分辨的应用领域:拷贝数变异、突变检测、基因相对表达研究(如等位基因不平衡表达)、二代测序结果验证、miRNA表达分析、单细胞基因表达分析等。
数字PCR技术不断发展,Bio-Rad、LIFE Technologies及RainDance等厂家相继推出技术较为成熟的数字PCR产品。QuantaLife公司开发出的微滴数字PCR技术。该产品还获得了2011年度Frost & Sullivan北美新产品创新奖。2011年10月,Bio-Rad公司收购了QuantaLife和ddPCR技术,相继推出了QX100、QX200微滴式数字PCR系统。
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