微滴式数字PCR技术,是将样本通过微滴发生器进行微滴化处理,制成约2104个1nL体积的微滴后进行PCR反应。PCR反应结束后,宁波正规数字PCR检测服务,使用微滴检测器对每个微滴逐个检测,**终经分析软件计算出目标DNA分子的浓度(copies/L)[2]。本研究选择人mtDNA两个编码基因ND4和16SrRNA,设计特异性引物与探针,与检测样本制成反应混合液,运用微滴式数字PCR技术,检测阳性反应的微滴并计数,达到同时进行种属鉴定和***定量的目的,宁波正规数字PCR检测服务。1材料与方法1,宁波正规数字PCR检测服务.1样本制备1.1.1人mtDNAND4基因片段重组质粒的制备和稀释根据人mtDNAND4基因全长参考序列
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数字PCR通过将一个样本分成几十到几万份,分配到不同的反应单元(微滴),包含一个或多个拷贝的核酸分子(也就是说我们所说的 DNA 模板) ,这是与PCR或qPCR反应比较大的区别,PCR或qPCR只在一个反应体系中进行,而数字PCR在每个反应单元(微滴)中都会对目标分子进行扩增,扩增结束后统计荧光信号并分析。是不是听起来特别高(yi)大(lian)上(meng)?举个栗子,PCR或qPCR检测突变像是在大海里捞一个会发光的针,周围都是海水,很难看到针的光在哪,而dPCR就像把海水盛到好多个碗里面,瞧一眼很容易就知道哪个碗在发光了,而且,系统还会数出来到底有多少个碗里是发光的,多少个碗里是没发光的,这样一比,不就很容易的知道有多少数量的突变,就能做到***定量了。
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