[VIP第1年] 指数:3
一代PCR采用电泳的方式对PCR产物进行分析，主要的分析内容有：条带大小、条带数量、条带浓度等。根据电泳条带的这些信息能够实现研究者的某些实验目的，比如制备DNA片段、检测目的序列、对目的基因表达进行定性分析等。一代PCR的比较大缺点在于无法实现精确定量。概括一代PCR：看PCR产物的电泳条带。二代PCR即荧光定量PCR，它通过在反应体系中加入能指示反应进程的荧光试剂来实时监测荧光的积累，借助荧光曲线的Cq值来定量起始靶基因的浓度。但依赖于Cq值仍然是目前定量PCR比较大的技术瓶颈，只有在规范的实验流程、统一的设计思路下，得到的结果才具有可重复性和可比性，北京微滴式数字PCR检测。而且在低拷贝靶分子，北京微滴式数字PCR检测、模板浓度差异细微的条件下，其检测的灵敏度，北京微滴式数字PCR检测、精确度都受到了限制。概括第二代PCR：检测反应体系中荧光的实时变化。三代PCR即数字PCR应运而生，它采用直接计数目标分子而不再依赖任何校准物或外标，即可确定低至单拷贝的待检靶分子的精确数目。实现这一过程的关键在于采用某种分散手段，使一个完整的PCR体系分散成为成千上万个**的PCR体系，每个PCR体系中只包含一个或零个模板（实际每个微体系中的模板数符合泊松分布）。这样分别检测这些体系是否发生了PCR反应并且进行计数。
全自动定量Western系统自动上样 ，电泳分离、抗体孵育、化学发光、数据分析，可相对定量分析也可***定量分析。无需制胶、无需转膜、 重复性好、真正定量、 快速灵敏， 所需的样本量极少（样品量只需3-5ul），整个实验的时间很短（只需把样本、一抗等试剂加入微孔板中，3个小时左右出具检测结果），即使在不同实验室，不同的实验操作者，得到的结果一致性也很好（每种靶蛋白的CV值不超过10%），检测灵敏度高（可检测低至pg级），无需转膜可检测大分子量蛋白（蛋白分子量可达400KD)，数据***：自动输出目标蛋白的分子量、峰面积、蛋白浓度等分析数据，印迹图片清晰美观。
QX200 Droplet数字PCR(Digital PCR) 系统的应用领域： **生物标志物研究和拷贝数变异分析 以***的灵敏度和准确度测量**突变的变异程度、检测稀有的 DNA 靶拷贝以及解析拷贝数变异状态。 病原体检测 精确地对靶 DNA 或 RNA 分子中的细微变化进行定量分析，从而检测和监测病原体。 与新一代测序 无缝对接 无需使用标准曲线，直接对 NGS 库执行***定量分析。 基因表达分析 可对少量 mRNA 和 miRNA 的细微变化进行准确及重复性较好的检测。 环境监测 使用 QX200 系统可测试多种环境样品，例如土壤和水。 食品检测 采用经过验证的 ddPCR 方法对转基因生物体 (GMO) 进行评估。
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