蛋白和多糖污染可能的原因如下:
样品中蛋白和多糖含量高,北京操作简单RNA提取试剂盒QQ 804036498,建议加入氯仿之前先高速离心去除蛋白和多糖。
吸取上层无色水相时不小心吸入一些中间蛋白层的物质,建议将移液***头中的液体放回分层的离心管中,重新进行离心后再小心吸取上层水相即可,北京操作简单RNA提取试剂盒QQ 804036498。
样品量太大,裂解不完全也会导致 RNA 样品中蛋白和多糖污染。
A260/A280 的比值低于 1.65
可能的原因如下:1、RNA 样品溶于 TE 溶液,北京操作简单RNA提取试剂盒QQ 804036498,低离子浓度和低 pH 条件下,A280 的数值会较高, 导致比值低。
样品匀浆时加的 Trizol 试剂量太少。
匀浆后样品未在室温放置 5 分钟,会导致蛋白的析出不完全,也会增加 A280的数值。
***得到的 RNA 沉淀溶解不完全。
RNAExpress Total RNA Kit是新赛美生物研发的新一代快速***的总RNA提取试剂盒,提高了裂解液的效果和增强了提取的灵敏度。通过对产品的多重优化,**快能在10分钟之内得到纯度更好,质量更高的总RNA,不含有基因组DNA和蛋白质的污染。同时对硅基质膜的改进增强了对RNA的吸附能力,每个吸附柱可处理高达50mg组织,或5X106细胞。在优化的试剂中加入了RNA保护剂,防止RNA在操作过程中发生降解,即使在室温条件下也可以完成。提取的总RNA可用于Northern Blot,Dot Blot,PolyA筛选,体外翻译,RNase保护分析和分子克隆。
向匀浆样品中加0.2ml氯仿,盖好管盖,剧烈振荡15秒,室温放置3-5分钟。
2-8℃ 12000 rpm离心10分钟。RNA主要在上层无色的水相中,把水相转移到新管中,不要吸到沉淀。
吸附柱前处理:在吸附柱中加入500ul 洗柱液,室温放置2分钟,2-8℃ 12,000 rpm离心2min,弃废液。
第4步收集的上清中加入200ul无水乙醇混匀,加入吸附柱静置2分钟,2-8℃ 12000rpm离心2min,弃废液。
向吸附柱中加入600ul漂洗液(使用前请先检查是否已加入无水乙醇),2-8℃ 12,000 rpm离心2min,弃废液。
向吸附柱中加入600ul漂洗液,2-8℃ 12,000 rpm离心2min,弃废液。
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