[VIP第1年] 指数:3
这些细胞仍然具有相应的表型和稳定的核型。而使用原*基因导致细胞永生化的，细胞往往会发生核型变化，特别是当细胞被多次传代以后，北京HPV法细胞永生化。通过hTERT介导的永生化细胞可以观察到以下特性：1、正常细胞周期控制；2、接触***；3、锚定依赖；4、保留对血清和有丝分裂原的正常生长反应；5，北京HPV法细胞永生化、需要生长因子进行增殖；6、具有正常核型；7、没有与转化相关的变化，北京HPV法细胞永生化，如致瘤性，可以在软琼脂上生长。hTERT介导的永生化细胞系结合了原代细胞的生理属性和细胞系的长期培养特性，同时避免前者的衰老和后者的不稳定核型。此外，在许多研究中，hTERT介导永生化细胞可以诱导分化为不同的细胞，这些分化后的细胞具有特定组织特性并表达分化细胞特异性蛋白，并可以形成在只有在体内才能形成的某型结构。ATCC人端粒酶逆转录酶（hTERT）永生化细胞系**了细胞生物学研究的一个重大突破，联合了原代细胞的生化属性以及传统细胞系长期培养的特性。•即使在高代次，也能够维持细胞在体内的生物学特性；•生命周期是原代细胞的5倍；•基本维持二倍体核型；•与原代细胞比较，基因表达基本不发生变化；•没有批间差；•减少实验结果的不一致性。
链霉素对豚鼠耳石层的影响[J];国外医学(耳鼻咽喉科学分册);1998年04期7刘俊;孔维佳;张亚民;张丹;;应用嗜热菌蛋白酶快速分离活性纯椭圆囊感觉上皮细胞及其意义[J];听力学及言语疾病杂志;2006年05期8王薇;;内淋巴积水病的椭圆囊半规管改变[J];国外医学.耳鼻咽喉科学分册;1986年04期9刘俊;孔维佳;赵荣祥;;大鼠椭圆囊再生毛细胞前体细胞来源的初步研究[J];听力学及言语疾病杂志;2009年05期10敖华飞;王正敏;穆美云;;耳蜗及前庭组织培养法的建立[J];中国眼耳鼻喉科杂志;1998年03期中国重要会议论文全文数据库前5条1刘俊;孔维佳;;大鼠椭圆囊感觉上皮细胞长期培养体系的建立及毛细胞标记物表达的意义[A];中华中医药学会耳鼻喉科分会第15届学术交流会论文集[C];2009年2刘俊;;毛细胞标记物在大鼠椭圆囊感觉上皮细胞离体培养中表达的意义[A];2007浙江省耳鼻咽喉—头颈外科学术会议论文汇编[C];2007年3刘俊;丛品;赵荣祥;洪钱江;;大鼠椭圆囊感觉上皮细胞长期培养体系的建立及毛细胞标记物表达的意义[A];中医耳鼻喉学术传承与研究论文汇编[C];2009年4刘俊;丛品;赵荣祥;洪钱江;;大鼠椭圆囊感觉上皮细胞长期培养体系的建立及毛细胞标记物表达的意义[A]。
一、 试剂
1、 淋巴细胞分离液：避光4度保存，用前在37度水浴中加温。整个分离过程中，温度应控制在8-28度，温度过高或过低均影响分离质量。
2、 全培养基（用前配置）：RPM1640培养基，内含20%胎牛血清（Gibco）{56℃灭活30分钟}，1.6-1.8% 1M的HEPES，1.2% 0.2mol/L谷氨酰胺，1%青霉素和链霉素。
3、 环胞酶素A（CyA）：5ml(250mg)/瓶，用1640培养基稀释成0.2mg/ml，使用时终浓度为2ug/ml(0.5%)。
4、 EBV液购自中国科学院遗传所，储存于零下80度。使用时从冰箱中取出，37度迅速融化，用0.22um的滤膜过滤，不要超过0.5-1小时。
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