[VIP第1年] 指数:3
细胞永生化端粒酶法
端粒酶是一种能延长端粒末端的核糖**白酶，由RNA和蛋白质组成。端粒酶能以自身的RNA为模板，从端粒DNA3’-OH 末端延伸端粒或合成新的端粒DNA， 以补偿细胞分裂时染色体末端的缩短，天津EBV法细胞永生化实验服务，从而维持端粒的长度，使细胞不会因端粒耗尽而出现凋亡。正常情况下，大多数体细胞端粒酶的表达是严格调控的，表达是瞬时和低水平的。在原代培养的细胞中稳定表达人端粒酶催化亚基(hTERT)基因能稳定端粒的长度，使细胞易于永生化，因此hTERT的activate是细胞永生化的重要步骤。虽然activate端粒酶活性能够使多种人和动物的细胞永生化，天津EBV法细胞永生化实验服务，天津EBV法细胞永生化实验服务，但是对于有些细胞，重建端粒酶活性并不足以使细胞永生化，还需要借助*基因法。
如果细胞未能增加端粒酶表达，那么它们也不能永生化，并且**终因端粒变短而死亡，这是因为染色体连接在一起，在细胞分裂时会破碎。具有这种TERT启动子突变的细胞更可能上调端粒酶，这就使得它们尽管具有非常短的端粒，但仍能继续生长。不过，Hockemeyer说，端粒酶水平是较低的，结果就是一些未受保护的染色体末端在存活的突变细胞中出现，这可能导致突变和进一步促进**形成。Hockemeyer说，“在我们的论文发表之前，人们可能认为在TERT启动子中*获得这一个突变就足以使细胞永生化，以及当这种情形在任何时候发生时，端粒缩短就被消除。我们证实这种TERT启动子突变不能立即足以阻止端粒缩短。”然而，仍然不清楚**终是什么导致端粒酶上调表达，从而使得细胞发生永生化。Hockemeyer说，它不可能是另一个突变，而是影响端粒酶基因表达的表观遗传变化，或转录因子或其他的结合到端粒酶基因上游启动子上的调节蛋白表达的变化。“然而，我们有证据证实，第二步必须发生，而且是在端粒的长度缩短至一个临界值时发生的，在这时，端粒是功能故障的，并且导致基因组不稳定。”回想起来，这并不令人吃惊虽然大多数**似乎需要端粒酶变得永生化。
正常组织来源的细胞在体外培养条件下可分裂生长，但经过有限次数的传代后，就会停止增殖，发生衰老和死亡，这种现象称之为海弗利克极限。有的细胞自发或受外界因素的影响，可以从增殖衰老危机中逃离，从而拥有无限增殖的能力，该过程称之为细胞永生化。然而自发永生化的几率非常小，啮齿类动物为10-5-10-6， 而人类细胞则更为罕见， 小于10-12。通过转染技术将外源性永生化基因导入目的细胞或诱导衰老相关基因突变，可以增加永生化的发生率，从而建立稳定的永生化细胞株。
永生化细胞能够提供稳定均一、性状一致的细胞来源，并且可以降低材料成本，因此，它是体外研究细胞增殖、分化、凋亡、衰老等的理想模型，加之，永生化细胞和肿瘤细胞关系密切，所以永生化细胞也是研究**发生机制的重要模型。另外，由于永生化细胞具有可以多次传代的特性，可以利用各种细胞永生化的方法使那些传代困难、增殖缓慢、容易衰老的细胞获得永生，从而为研究人员提供更多的细胞资源。
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