[VIP第1年] 指数:3
建立人卵巢*永生化细胞系,为卵巢*体外研究提供实验模型。方法利用基因重组技术构建猴肾virus40(SV40)T抗原基因的gaoxiao真核表达载体pcD2SV40。将其转染10例原代培养的早期传代细胞,经G418筛选,抗性克隆扩大培养,建立永生化细胞系。免疫组化检测细胞的上皮起源,用PCR、RTPCR和SouthernBlot方法鉴定SV40T基因在转染细胞中的表达。观察所建立的永生化细胞系的染色体核型。结果10例转染细胞中，上海SV40法细胞永生化技术服务,6例筛选出抗性克隆。角蛋白免疫组化证实3例为上皮起源，上海SV40法细胞永生化技术服务。其中2例上皮起源细胞得以扩大培养成系,长期稳定传代,分别命名为BUPH:OVSC2和BUPH:OVCA3。经鉴定两种细胞系中存在SV40T在基因水平及转录水平的表达。其染色体核型均符合人体恶性细胞特征。结论利用SV40T抗原基因进行人卵巢*原代细胞的永生化是一种可行的，上海SV40法细胞永生化技术服务、可重复的建系方法,可提高卵巢*细胞成系机率。
细胞永生化端粒酶法
端粒酶是一种能延长端粒末端的核糖**白酶，由RNA和蛋白质组成。端粒酶能以自身的RNA为模板，从端粒DNA3’-OH 末端延伸端粒或合成新的端粒DNA， 以补偿细胞分裂时染色体末端的缩短，从而维持端粒的长度，使细胞不会因端粒耗尽而出现凋亡。正常情况下，大多数体细胞端粒酶的表达是严格调控的，表达是瞬时和低水平的。在原代培养的细胞中稳定表达人端粒酶催化亚基(hTERT)基因能稳定端粒的长度，使细胞易于永生化，因此hTERT的activate是细胞永生化的重要步骤。虽然activate端粒酶活性能够使多种人和动物的细胞永生化，但是对于有些细胞，重建端粒酶活性并不足以使细胞永生化，还需要借助*基因法。
例如EB***(epstein-barrvirus,EBV)、猿猴***40(simianvirus40,SV40)和人**瘤***(humanpapillomavirus,HPV)。这些******其天然宿主细胞，能诱导细胞永生化。EBV能使B淋巴母细胞永生化形成淋巴母细胞样细胞系，它是通过潜伏蛋白***细胞因子与其受体相互作用的途径使细胞永生的。EBV永生化B细胞的一个*****的特点是端粒酶活性的提高，这可能是导致B细胞永生的主要原因。目前，EB***介导的细胞永生化应用**多的是B淋巴细胞，其他细胞中的应用很少。SV40是简单的真核细胞***，SV40的T抗原片段是**常用的目的片段，将其整合入靶细胞核内并表达，可导致细胞增殖活力的改变并表现出多种与**相关的转化显型。应用的方法包括：野生型SV40***共培养***靶细胞、磷酸钙法、电穿孔以及逆转录***载体法等。HPV已成功将人的包皮细胞、角化上皮以及乳腺、胰导管和口腔等的上皮细胞永生化。HPV***的早期表达蛋白E6和E7在细胞永生化中起决定性作用。E6和E7蛋白能够改变细胞的终末分化，诱导细胞进入S期，使细胞绕过正常细胞的周期检查点。***法获得的永生化细胞往往发生细胞表型改变，而且一般只应用于***的特定宿主细胞。由于该法将整个***基因组导入了细胞，因此。
文章来源地址: http://nongye.m.chanpin818.com/nlmyxmhz/deta_4003761.html
免责声明： 本页面所展现的信息及其他相关推荐信息，均来源于其对应的用户，本网对此不承担任何保证责任。如涉及作品内容、 版权和其他问题，请及时与本网联系，我们将核实后进行删除，本网站对此声明具有最终解释权。