免疫印迹法(immunoblotting )因与Southern早先建立的检测核酸的印迹方法Southern
blot相类似,亦被称为Western blot,北京全自动Western Blot检测分析服务。免疫印迹(western blotting)是在蛋白质电泳分离和抗原抗体检测的基础上发展起来一项检测蛋白质的技术。它将SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳的辨力与抗原抗体反应的特异性相结合。典型的印迹实验包括三个步骤①蛋白质的电泳分离;②将电泳后凝胶上的蛋白质转移至固体膜上,北京全自动Western Blot检测分析服务,北京全自动Western Blot检测分析服务,用非特异性,非反应活性分子封闭固体膜上未吸附蛋白质区域;③免疫学检测。免疫印迹克服了聚丙烯酰胺凝胶电泳后直接在凝胶上进行免疫学分析的弊端,极大地提高了其利用率、分辨率和灵敏度,使其成为使用**的免疫化学方法之一。
全自动单细胞western blot检测分析原理:全自动单细胞western blot分析是单细胞水平,蛋白质表达定量分析系统。系统采用**的微流控western blot芯片,通过单细胞微孔设计,采集单细胞,然后原位裂解细胞,释放蛋白,进行蛋白质电泳,将不同分子量蛋白进行分离,提高免疫学检测特异性。之后,采用**技术进行蛋白质原位捕获,使用western blot验证抗体及荧光标记二抗直接杂交,扫描仪进行芯片扫描后,分析软件对扫描结果进行深度定量分析。
(1) SDS-PAGE凝胶配制
SDS-PAGE凝胶可以使用商业生产的SDS-PAGE凝胶配制试剂盒。
(2) 样品处理:在收集的蛋白样品中加入适量浓缩的SDS-PAGE蛋白上样缓冲液。例如2X或5X的SDS-PAGE蛋白上样缓冲液。使用5X的SDS-PAGE蛋白上样缓冲液可以减小上样体积,在相同体积的上样孔内可以上样更多的蛋白样品。5X的SDS-PAGE蛋白上样缓冲液可以参考相关文献资料配制100℃或沸水浴加热3-5分钟,以充分变性蛋白。
(3) 上样与电泳:冷却到室温后,把蛋白样品直接上样到SDS-PAGE胶加样孔内即可。 为了便于观察电泳效果和转膜效果,以及判断蛋白分子量大小,比较好使用预染蛋白质分子量标准(P0066)。电泳时通常推荐在上层胶时使用低电压恒压电泳,而在溴酚蓝进入下层胶时使用高电压恒压电泳。对于Bio-Rad的标准电泳装置或类似电泳装置,低电压可以设置在80-100V,高电压可以设置在120V左右。SDS-PAGE可以采用普通的电泳仪就可以满足要求。通常电泳时溴酚蓝到达胶的底端处附近即可停止电泳,或者可以根据预染蛋白质分子量标准的电泳情况,预计目的蛋白已经被适当分离后即可停止电泳。
文章来源地址: http://nongye.m.chanpin818.com/nlmyxmhz/deta_4016957.html
免责声明: 本页面所展现的信息及其他相关推荐信息,均来源于其对应的用户,本网对此不承担任何保证责任。如涉及作品内容、 版权和其他问题,请及时与本网联系,我们将核实后进行删除,本网站对此声明具有最终解释权。