[VIP第1年] 指数:3
–将抗原与抗体分别加入同一凝胶板中两个相隔一定间距的小孔内，使两者进行相互扩散，当抗原抗体浓度之比相适宜时，彼此相遇形成一白色弧状沉淀线。·优缺点：简便，但敏感性较低，易出现假阴性结果。免疫双向扩散法的操作步骤·将玻璃板用水洗净后用75%乙醇冲洗，晾干后放在水平台上备用。·将l%agar融化后，置56C水浴。·在玻璃板上铺胶，约厚，凝固后打孔(直径3rnm)，孔间距10mm。·中心孔加5l抗原样品，周围孔内每孔加5l抗血清(抗体预先作系列倍比稀释即1:2、1:4、1:8、1:16、1:32等比例)。·凝胶板置湿盒内，室温扩散24h。·观察结果。抗体效价检测的其它方法·环状沉淀试验，需较多的抗血清，现已很少用；·对流免疫电泳，比琼脂免疫双扩散法敏感，较简便、实用；·酶联免疫吸附试验(ELISA)。(6)放血或定期抽血常用以下3种方法·颈动脉放血法：放血量较多，动物不易中途死亡。例如：。家兔、山羊、绵羊等动物**常用此法。·心脏**法：常用于家兔、豚鼠、大白鼠、鸡等小动物，江苏六色免疫组化技术服务，但操作不当易引起动物死亡。·静脉**：家兔可用耳缘静脉**；山羊，江苏六色免疫组化技术服务、绵羊，江苏六色免疫组化技术服务、马和驴可用颈静脉**，这种放血法可隔日1次，有时可采集多量血液。(6)放血或定期抽血。
中级——问题求助和不断总结；高级——难题解答和经验分享这三个阶段，也学到了不少知识，积累了很多宝贵经验，与大家一起分享下。免疫组化实验为例从我接触的很多本科生和研究生中发现，他们的确是免疫组化“新手”，他们只注重如何做和**终的结果，但对为什么这样做不太感兴趣。他们常按照网上所说的方法，摸索好的抗体浓度和条件后做出很漂亮的染色结果后，他们就认为自己已经掌握了免疫组化方法了，结果不求上进，更换一种新抗体后或实验出现异常结果后就很难做出来了。当然，免疫组化对于我来说，做过很多，但也不能说什么都会，只不过我做的多了，失败多了和思考多了，可能比新手多了解一些其中的诀窍，拿来与大家进行分享。此外，我个人经验不可能面面俱到，还需要更多有经验的高手一起分享、纠正和补充。在这里，我需要感谢中华病理网、丁香通、小木虫论坛给我很大的帮助，还有上海舜田生物技术人员老师给我实验很多指导和帮助，让我受益匪浅。免疫组化免疫个人感悟1、其实免疫组化，我个人感觉方法和操作都不是很难，关键是结果出现异常时该如何去解决？我认为首先需要掌握好免疫组化实验的原理，知道每一个操作步骤的目的。
9、碱性磷酸酶碱性磷酸酶（AKP），又称碱性磷酸单酯酶，是酶组织化学中**常用的酶之一。分布***，常见于活跃运输的膜上。该酶在碱性环境下能催化各种醇和酚的磷酸酯水解，**适pH为，可被Mg2+、Mn2+和某些氨基酸所***；**物、碘液、砷酸盐等可***其活性。显示AKP的方法很多，主要有钙钴法和同时偶联法。前者所需试剂便宜，容易购买，操作简单，但会出现假阳性。后者方法较灵敏，而且在正常组织内不存在萘酚，因此不会出现假阳性，但所需试剂较难购买。10、生物素（biotin）生物素是B族维生素之一。生物素在羧化、脱羧和转羧化反应中起辅酶作用。生物素是含硫水溶性维生素。广布于动物及植物组织，已从肝提取物和蛋黄中分离，是多种羧化酶辅基的成分。生物素标记反应简单、温和且很少***抗体活性，生物素标记的抗体可存放多年而不失活。能与生物素结合的二级试剂素，所需的各种标记物均可购置。此外，亲和素和链霉亲和素的结合背景水平非常低，结合紧密且快速，抗体很容易与经过化学修饰的活化生物素结合。生物素又可以与结合有酶、荧光染料的亲和素或链霉亲和素连接，后者已有商品试剂供应。这样只需将纯化抗体与生物素结合，就可用各种不同的标记物来检测。
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