免疫组织化学是一项在医学基础与临床科研中被广泛应用的一项技术,免疫组化染色服务也是生物公司的一项常规服务之一。该技术融合了抗原和抗体特异性结合的免疫学技术与组织学技术,通过化学反应使标记抗体的显色剂显色,来对组织或细胞内抗原进行定位和定量研究。肽类、***、神经递质、细胞因子、受体、表面抗原等,它们的组织细胞内具有抗原性的物质,所以均可以用免疫组织化学方法显示。免疫组化常用的显色剂包括荧光素、酶、生物素和铁蛋白等。11、金属离子和金属蛋白复合物
金属离子和金属蛋白复合物如铁蛋白,江苏多色荧光免疫组化染色服务、金和汞可以作为免疫组化反应中的标记物。如铁蛋白等,主要应用于免疫电镜。免疫金银法的基本原理是用特异性抗体与抗原反应,随后用金标记的间接抗体或SPA蛋白,再与特异性抗体结合,江苏多色荧光免疫组化染色服务,用乳酸银处理,使银颗粒沉积在金颗粒上,江苏多色荧光免疫组化染色服务,还原银反应而显示出黑褐色。适用于石蜡切片、冰冻切片,培养细胞,细胞涂片和树脂包埋的电镜切片。这种方法敏感性高,可检测组织中微量抗原,定位准确、无扩散现象且背景清洗,对比度好、方法简便。
使用的玻片等载体,都必须厚度均匀,无明显的自发荧光,如果使用油镜,还必须保证镜油为无荧光镜油;电源比较好装稳压器,否则电压不稳不仅会降低汞灯的寿命,也会影响镜检的效果。3、免疫组化和免疫荧光结果分析:见***场试验讲座。案例一DAB染色后切片着色一片黄/背景深背景:奥运会期间我们课题组研究生都在实验室做实验,许多从北京购买的试剂买不到,对我们的许多实验产生了很大的影响。我以前一直用中杉金桥的SP三步法染色试剂盒,效果不错,在奥运会期间我准备做同批实验分不同批次酶免疫组化实验,***批组化实验结果很好,抗体浓度感觉比较合适(SantaCruz公司1:200),等做第二批时发现封闭血清不够了,为了保证实验顺利进行,我又从福州迈新顶了一个SP试剂盒,同时抗体稀释液也不够了,我又重新从博士德公司买了一小瓶10ml。从第二批实验开始,组化实验结果一直显示强背景着色,特异性染色很难辨别。后来我将标本拿到上海舜田生物去做,做了效果很不错,于是我就请教了他们公司从事病理30多年经验的老师,她告诉我应该如何去分析和解决问题,很快我就找到了思路,结果问题终于解决了。
9)抗体稀释液其实许多实验室抗体稀释液就用一般PBS即可,但**的抗体稀释液中除PBS成份外,还加了叠氮化钠防腐剂、BSA稳定剂等组份,对抗体的多次回收利用较好。正因为这种原因,我一直用国产的**抗体稀释液,一段时间在更换新抗体稀释液时实验结果出现了阴性结果(提示可能一抗没有结合),***从抗体浓度和孵育时间、封闭时间等原因排除后,发现是新抗体稀释液的PH值偏酸,而使抗原抗体反应不佳,终而出现假阴性结果。10)切片清洗(浸洗、冲洗和漂洗)为了防止一抗、二抗等试剂残留而引起非特异性染色,所以适当地加强清洗(延长时间和增多次数)尤为重要,我一般在一抗孵育前的清洗是3min*3次,而一抗孵育后的清洗均为5次*5min。注意:①单独冲洗,防止交叉反应造成污染。②温柔冲洗,防止切片的脱落。我喜欢用浸洗方式;③冲洗的时间要足够,才能彻底洗去结合的物质。④PBS的PH和离子强度的使用和要求。这方面我有惨痛教训,当时我买的抗体稀释液偏酸,结果背景一片黄(未见特异性染色),建议PH在。(中性及弱碱性条件(PH7-8)有利于免疫复合物的形成,而酸性条件则有利于分解;低离子强度有利于免疫复合物的形成。
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