荧光染料可与双链DNA结合,每个循环的延伸阶段,染料掺入双链DNA中,其荧光信号强度与PCR产物的数量呈正相关。同时,其缺点也在于其非特异性。当PCR反应中有引物二聚体或者非特异性扩增时,该染料也可以和这些非特异性扩增产物结合,发出荧光,从而干扰对特异性产物的准确定量。
常用的染料为SYBR Green I,各公司针对荧光信号强度、***作用等进行改进,江苏水体基因组荧光定量PCR检测服务,也推出了很多新的染料供大家选择,江苏水体基因组荧光定量PCR检测服务。
Promega采用新型荧光染料BRYT Green® Dye,江苏水体基因组荧光定量PCR检测服务,对qPCR反应没有***作用,与双链DNA结合后荧光信号更强.
转基因:利用荧光定量PCR技术将转基因信号扩增放大。
在环境监测方面的应用实时荧光定量PCR技术已经被国内外应用在环境监测中,提高了监测水平。此项技术可以检测河流中环境微生物随着季节变化的情况。还可以用来对地表水和饮用水中致病菌进行检测以便及时预告地表水污染情况以及采取相应有效措施避免大范围污染
仪器摆放:实时荧光定量 PCR 仪应安放在湿度较低、灰尘较少、远离水池的平稳台面上,不能有强光直射,室内应通风良好,无腐蚀性气体
荧光定量PCR技术是指在PCR反应体系中加入荧光基团,通过荧光信号不断累积而实现实时监测PCR全程,然后通过标准曲线对未知模板进行定量分析的方法。在实时荧光定量PCR中,对全程PCR扩增过程进行实时检测,根据反应时间和荧光信号的变化可以绘制成一条曲线
Ct值:C**Cycle,t**threshold,Ct值的含义是每个反应管内的荧光信号到达设定的域值时所经历的循环数
荧光背景信号阶段:在荧光背景信号阶段,扩增的荧光信号与背景无法区分,无法判断产物量的变化
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