[VIP第1年] 指数:3
实时荧光定量PCR在病原微生物检测中的应用
实时荧光定量PCR是通过荧光信号监测目的基因扩增数量的定量PCR技术,具有灵敏度高,检测速度快等优点。实时荧光定量PCR已被应用于乙肝病原微生物、登革热病原微生物、流感病原微生物、水疱口炎病原微生物等病原微生物的快速检测,在病原微生物快速分型、相似病原微生物的鉴别检测、耐药病原微生物突变体检测等临床和公共卫生领域得到广泛应用。狂犬病是危害严重的**共患病,病死率几乎为。实时荧光定量PCR技术已被应用于狂犬病病原微生物和狂犬病相关病原微生物的核酸检测,具有与金标准DFA相当的灵敏度和特异度,同时克服了金标准DFA的某些局限性,如检测速度更快,无需提取脑组织,对唾液、脑脊液等低病原微生物载量样本具有较好的检出效果，天津基因突变荧光定量PCR实验技术服务,具有成为人间狂犬病诊断技术的潜力，天津基因突变荧光定量PCR实验技术服务，天津基因突变荧光定量PCR实验技术服务。灵敏度是传统RT-PCR的200倍以上,交叉污染的风险更低。实时荧光定量PCR也应用于欧洲蝙蝠病原微生物等狂犬病相关病原微生物的检测,可建立多重实时荧光定量PCR在单一检测体系对多种病原微生物进行快速鉴别,对于预防病原微生物性传染病具有重要的公共卫生意义。
荧光信号**扩增阶段：只有在荧光产生进入**期， PCR产物量的对数值与起始模板量之间存在线性关系，所以在PCR反应处于**期的某一点上来检测PCR产物的量，由此来推断模板**初的含量而进行定量分析。研究表明，每个模板的Ct值与该模板的起始拷贝数的对数存在线性关系，起始拷贝数越多，Ct值越小。通过已知起始拷贝数的标准品可得到标准曲线，只要获得未知样品的Ct值，即可从标准曲线上计算出该样品的起始拷贝数
在平台期，扩增产物已不再呈**级的增加，所以反应终产物量与起始模板量之间已经不存在线性关系，通过反应终产物也算不出起始DNA拷贝数
Rn 值是由 Applied Biosystems™ FAM™ 染料的荧光除以 ROX 染料的荧光而计算得出的比率。因此，假定 FAM 染料产生的荧光信号保持不变，ROX 染料量越少，产生的 Rn 值就越高。这将导致 Rn 基线上升，以及随后 ΔRn 的减少和 Ct 值的变化。通过降低 ROX 染料水平而得到不同 Ct 值，没有对反应的真实灵敏度产生任何影响，却有着意想不到的后果。如图 4 所示，降低 ROX 染料的浓度可能会增加 Ct 值的标准差。标准差越大，分辨靶浓度之间的细微区别的可信度就越低（参加下文的精确度一节）。
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