[VIP第1年] 指数:3
拷贝数分析基因拷贝数变异（Copy number variations，江苏微滴式数字PCR检测，CNVs）是指人类基因组中存在的，较之于参照基因组DNA片段缺失或复制大于1kb到Mb的亚微观结构变异，CNVs本身蕴含着丰富的遗传信息，对于研究基因变异在生物进化及疾病进程等领域具有重要意义。相较于现有的CNVs研究技术（定量PCR，江苏微滴式数字PCR检测、高密度寡核苷酸芯片high
density oligo nucleotide array，FISH，比较基因组芯片microarray
based comparative genomic hybridization，array-CGH，测序等），数字PCR在灵敏度和分辨率方面更具优势，江苏微滴式数字PCR检测，尤其适用于更高拷贝数分析，确定确切的拷贝数，检测精度超过±10%。
原**白表达是将植物、动物、微生物等的目的基因插入合适载体后导入大肠杆菌（E. coli）表达出大量目的蛋白。大肠杆菌用于表达重组蛋白有以下优点：易于生长和控制；易于培养，实验耗费少；可选择多种大肠杆菌菌株及与之匹配的具各种特性的质粒。可从质粒构建、基因表达、蛋白纯化等一系列服务。 原核表达载体系统有：pET系列；pGEX系列。
1. 目的基因获取：客户提供含有目的基因的质粒或PCR扩增或密码子优化全基因合成。 2. 载体构建：将目的基因克隆到合适的表达载体并测序验证。 3. 蛋白表达预实验：将表达质粒转化到***的E. coli表达菌株中。挑选3个阳性克隆于LB培养基中扩增并选择合适的条件，SDS-PAGE检测蛋白表达情况，筛选出合适菌株以及比较好表达条件。 4. 蛋白表达纯化： 纯化蛋白（可溶表达—亲和纯化 包涵体表达—变性复性），SDS-PAGE、Western blotting检测验证目标蛋白正确性。实验周期：6-8周。
数字PCR是一种核酸分子***定量技术。当前核酸分子的定量有三种方法，光度法基于核酸分子的吸光度来定量；实时荧光定量PCR（Real Time PCR）基于Ct值，Ct值就是指可以检测到荧光值对应的循环数；数字PCR是***的定量技术，基于单分子PCR方法来进行计数的核酸定量，是一种***定量的方法。主要采用当前分析化学热门研究领域的微流控或微滴化方法，将大量稀释后的核酸溶液分散至芯片的微反应器或微滴中，每个反应器的核酸模板数少于或者等于1个。
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