[VIP第1年] 指数:3
·目前已经有商品化的试剂盒，使用起来非常方便。(2)碱性磷酸酶(AP)及底物·AP为磷酸酯的水解酶，可通过两种反应显色：–偶氮偶联反应，底物为-萘酚磷酸盐，经水解后得-萘酚，与重氮化合物如坚牢蓝(fastblue)或坚牢红(fastred)形成不溶性沉淀，分别呈兰色或红色。–靛蓝-四唑反应：底物为溴氯羟吲哚磷酸盐(5-bromo-4-chloro-3-indodylphosphate,BCIP)，经酶水解并氧化形成靛蓝，而氮蓝四唑(NBT)在此氧化过程中被还原成不溶性紫兰色沉淀。2、常用的免疫酶染色方法·又分为以下两种方法：–酶标抗体法·直接法·间接法–非标记抗体酶法·酶桥法·PAP法(1)酶标抗体法·通过共价键将酶结合在抗体上，制成酶标抗体，与标本进行反应后，再用酶组化法将酶显色，使之生成有色的不溶性产物或具有一定电子密度的颗粒，以供光镜和电镜观察。–优点：切片能长期保存、反复观察，适于镜下半定量分析。–缺点：酶与抗体形成的共价键，可损害抗体和酶的活性；易产生非特异染色。(1)酶标抗体法——直接法·将酶直接标记在一抗上，上海四色免疫组化分析服务，上海四色免疫组化分析服务，然后直接与相应抗原特异地结合，上海四色免疫组化分析服务。形成抗原-抗体-酶复合物，***用底物显色剂显色。(1)酶标抗体法——间接法·将酶标记在二抗上，先将一抗与相应的抗原结合。
我单独做了一次实验来排除该因素。结果孵育2、5min时先出现背景，而特异性染色较浅，故这不符合常理，一般先出现特异性染色，然后随着时间的延长，会出现非特异性背景着色。3、***，血清封闭的问题？以前我一般孵育15-30min，所以我单独做了一次实验用血清封闭室温1h，其它条件同做出来的那一次，结果也一样背景着色很深。4、此外，我在改进的同时，也对PBS清洗不断地延长时间和增加次数，甚至完全参照试剂盒说明书来进行操作（我以前一般一抗4℃过夜且室温复温45min、二抗37℃30min、SP反应37℃30min），以及过氧化氢灭活加强等等均未起到效果。我冷静地分析了一下整个实验流程，与***次做出来相比，只有两个地方做了改动：因血清不够而更换了不同厂家试剂盒、因抗体稀释液用完而重新买了抗体稀释液。5、我用PBS替代一抗稀释液（我以前还回收抗体，自我觉得抗体稀释液中含防腐剂和蛋白稳定剂），其它步骤和组织切片完全与***次做出来的一致（包括血清也是老试剂盒内剩余的一点），奇迹出现了：结果很好。因为抗原抗体反应除温度、抗原/抗体浓度外，然后就是pH值，于是我测了新抗体稀释液、老抗体稀释液和PBS的pH值，结果是前者偏酸性（<6、0），而后两者均在7、5左右。
9、碱性磷酸酶碱性磷酸酶（AKP），又称碱性磷酸单酯酶，是酶组织化学中最常用的酶之一。分布***，常见于活跃运输的膜上。该酶在碱性环境下能催化各种醇和酚的磷酸酯水解，最适pH为，可被Mg2+、Mn2+和某些氨基酸所***；氰化物、碘液、砷酸盐等可***其活性。显示AKP的方法很多，主要有钙钴法和同时偶联法。前者所需试剂便宜，容易购买，操作简单，但会出现假阳性。后者方法较灵敏，而且在正常组织内不存在萘酚，因此不会出现假阳性，但所需试剂较难购买。10、生物素（biotin）生物素是B族维生素之一。生物素在羧化、脱羧和转羧化反应中起辅酶作用。生物素是含硫水溶性维生素。广布于动物及植物组织，已从肝提取物和蛋黄中分离，是多种羧化酶辅基的成分。生物素标记反应简单、温和且很少***抗体活性，生物素标记的抗体可存放多年而不失活。能与生物素结合的二级试剂素，所需的各种标记物均可购置。此外，亲和素和链霉亲和素的结合背景水平非常低，结合紧密且快速，抗体很容易与经过化学修饰的活化生物素结合。生物素又可以与结合有酶、荧光染料的亲和素或链霉亲和素连接，后者已有商品试剂供应。这样只需将纯化抗体与生物素结合，就可用各种不同的标记物来检测。
文章来源地址: http://nongye.m.chanpin818.com/nlmyxmhz/deta_4497262.html
免责声明： 本页面所展现的信息及其他相关推荐信息，均来源于其对应的用户，本网对此不承担任何保证责任。如涉及作品内容、 版权和其他问题，请及时与本网联系，我们将核实后进行删除，本网站对此声明具有最终解释权。