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RNA 常用提取方法（1）

1、异硫氰酸胍氯化铯超速离心法:

     原理：使用蛋白质变性剂异硫氰酸胍有效制抑RN A 酶的活性，经过起始密度为1，江苏 RNA提取试剂盒现货供应QQ 804036498.78g/m l 的氯化铯介质，进行密度梯度超速离心，RNA沉淀于管底，而DNA与蛋白质在上清中。使用这种方法，不但能得到高质量的RNA ，而且能同时分离出细胞染色体DNA。

2、盐酸胍-有机溶剂法：

     原理：本法有MacDonald1987年在Strohman报道的方法基础上改进而成的，适用于没有超速离心及设备的情况下提取细胞总RNA。它利用盐酸胍制抑RNA酶，江苏 RNA提取试剂盒现货供应QQ 804036498，匀浆裂解细胞，江苏 RNA提取试剂盒现货供应QQ 804036498，有机溶剂抽提去除蛋白质,通过选择性沉淀RNA分子而去除DNA。

3、氯化锂-尿素法：

     原理：本法首先由Auffray报道,利用高浓度尿素变性蛋白质同时制抑RNA酶，3 mol/L LiCl选择性沉淀RNA。 

RNA提取注意事项（3）

破壁方法

细胞或组织的彻底匀浆对RNA提取来说，是一个很关键的步骤，它能够防止RNA的损失和降解。匀浆的方法应根据细胞或组织的类型来选择。大部分培养的细胞可以置于细胞裂解液中，通过简单的涡旋震荡来匀浆；而动物组织、植物组织、酵母和细菌、真核细菌则常常需要更加剧烈的方法，通常用液氮研磨。比如说细菌（特别是革兰氏阳性菌）的细胞壁，就需要溶菌酶消化来实现彻底的细胞裂解和RNA的比较大回收。酵母和革兰氏阳性菌通常还需要液氮研磨过程中加入玻璃微珠帮助破壁，酵母提取也可以加入诸如Lyticase等破壁酶帮助破壁，再用TRIpure或RNApure进行提取。

12000rpm离心2min，弃掉收集管，将吸附柱置于室温放置数分钟将吸附柱中残余的漂洗液去除。

 将吸附柱放入新管中，向膜**滴加50-100ul RNase free ddH2O，室温放置5min，12000rpm室温离心2min即得到RNA。

注意事项：所有相关器皿耗材都应为RNase-free产品，操作过程要小心，带口罩、手套避免环境中RNA酶污染样品。

RNA在水溶液中OD值可能在1.5-1.9之间，但这并不表示RNA不纯，需电泳检测。

就RNA的提取而言，不一定试剂盒的提取效果就非常好，其实采用一些经典的RNA提取方法，效果也很不错，如：TRIZOL、EDTA等，只是试剂盒使用方便，经典的方法操作复杂一些。

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