[VIP第1年] 指数:3
在PCR扩增时加入一对引物的同时加入一个特异性的荧光探针，该探针为一寡核苷酸：5’端标记一个报告荧光基团，3’端标记一个淬灭荧光基团。探针完整时，北京水体基因组荧光定量PCR技术服务，报告基团发射的荧光信号被淬灭基团吸收;PCR扩增时，Taq酶的5'-3'外切酶活性将探针酶切降解，使报告荧光基团和淬灭荧光基团分离，从而荧光监测系统可接收到荧光信号，北京水体基因组荧光定量PCR技术服务，北京水体基因组荧光定量PCR技术服务。
在荧光扩增曲线上人为设定的一个值，它可以设定在荧光信号**扩增阶段任意位置上，但一般荧光阈值的设置是PCR反应**-15个循环荧光信号标准偏差的10倍。
有关转基因及其产品的安全性的争论在国内外愈演愈烈，各国**纷纷出台一系列的政策、法规，要求对转基因作物进行标识，有些国家对转基因的比较低含量做了限定，其阈值大小从1-5％不等。这就要求必须对转基因及其产品进行检测。 常规的检测方法多采用PCR法，如PCR-凝胶电泳、PCR-ELISA等。这些方法普遍存在着PCR产物污染、特异性不高及速度慢等问题。荧光PCR技术是一种新近发展起来的检测技术，它的应用将从根本上解决这些问题。 1.收集了国内外商品化的转基因作物品种，并通过查阅有关文献及网站初步确定了各种作物的转基因构建图； 2．于反应体系中引入UNG去污染酶，建立了无污染荧光PCR扩增体系； 3．以植物内源基因18SrRNA为靶标，设计了特异性引物和荧光探针，建立了以18SrRNA基因的扩增与否来判断核酸提取质量好坏的方法； 4．以FAM荧光素为标记，建立了以35S、NOS、NPTⅡ、Pat、Bar、FMV和CryⅢa为筛选目标的转基因农作物荧光PCR定性检测体系； 5．分别以FAM和TET两种荧光素标记外源基因和内源基因，建立了转基因大豆及转基因玉米的荧光定量PCR检测体系。
实时荧光定量PCR技术原理将荧光基团加入到PCR反应体系中，通过不断累积荧光信号从而使对PCR全程的实时监测实现，再根据标准曲线定量分析未知模板的方法，即是荧光定量PCR技术。在实时荧光定量PCR中，实时检测全程PCR扩增过程，按照反应时间和荧光信号的变化能够将一条曲线绘制成。混合模板DNA和有荧光素的Taqman探针，遵守聚合酶链反应规律使高温变性，低温复性，适温延伸的热循环完成，切断和模板DNA互补配对的Taqman探针，荧光素在反应体系中游离。荧光在特定光激发下发出，被扩增的目的基因片段随着循环次数的增加呈级增长，Ct值根据实时检测与之对应的随扩增而变化荧光信号强度求取出来，同时对照多个已知模板浓度的标准品，就能够使待测标本目的基因的拷贝数得出。
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