[VIP第1年] 指数:3
9）抗体稀释液其实许多实验室抗体稀释液就用一般PBS即可，但**的抗体稀释液中除PBS成份外，还加了叠氮化钠防腐剂、BSA稳定剂等组份，对抗体的多次回收利用较好。正因为这种原因，我一直用国产的**抗体稀释液，一段时间在更换新抗体稀释液时实验结果出现了阴性结果（提示可能一抗没有结合），***从抗体浓度和孵育时间、封闭时间等原因排除后，发现是新抗体稀释液的PH值偏酸，而使抗原抗体反应不佳，终而出现假阴性结果。10）切片清洗（浸洗、冲洗和漂洗）为了防止一抗、二抗等试剂残留而引起非特异性染色，所以适当地加强清洗（延长时间和增多次数）尤为重要，我一般在一抗孵育前的清洗是3min*3次，而一抗孵育后的清洗均为5次*5min。注意：①单独冲洗，防止交叉反应造成污染。②温柔冲洗，防止切片的脱落。我喜欢用浸洗方式；③冲洗的时间要足够，才能彻底洗去结合的物质。④PBS的PH和离子强度的使用和要求，天津四色免疫组化技术服务，天津四色免疫组化技术服务。这方面我有惨痛教训，当时我买的抗体稀释液偏酸，天津四色免疫组化技术服务，结果背景一片黄（未见特异性染色），建议PH在。（中性及弱碱性条件（PH7-8）有利于免疫复合物的形成，而酸性条件则有利于分解；低离子强度有利于免疫复合物的形成。天津四色免疫组化技术服务
但也存在主次之分，出现问题了，需要通过先排除主要的，再依次排除次要的--这是衡量你对免疫组化原理掌握与否的关键所在。案例三石蜡切片免疫荧光染色呈阴性结果或非特异性结果背景：因实验需要，于2008年07月04日初次做肝脏组织ZO-1（一种胞膜蛋白，紧密连接蛋白）免疫荧光染色，以前我对酶免疫组化非常熟悉，在丁香园子内也有不少置顶贴和精华帖，但免疫荧光一直还没做过（原理知道，但细节不太了解）。我先用石蜡切片做了5次，结果一直不理想（表现为未见特异性强染色）；近几日，在舜田生物老师的帮助下，我又切了冰冻切片，做了2次，终于基本成功了。在这个过程中，我对免疫荧光染色技术有了全新的认识，而前些天发出免疫荧光求助贴，回复的很少，所以有必要加强对免疫荧光方面的讨论），不妥之处敬请指正。有人会问酶免疫组化做的好好的，为何要做免疫荧光？其实，这也是我以前思考的难题，现在我认为可能胞膜蛋白含量不高，用普通免疫免疫组化可能做不出来，需要敏感的免疫荧光方法来进行蛋白检测（我是看许多外文文献都是这样做的，因此选择免疫荧光染色。天津四色免疫组化技术服务
3、四甲基异硫氰酸罗丹明(TRITC)：该荧光素能与细胞内蛋白质结合，比FITC稳定性好，在生理条件下对pH值变化不敏感，荧光强度受自发荧光干扰小。比较大激发光波长为550nm；比较大发射光波长为620nm，呈橙红色荧光，与FITC发出的黄绿色荧光对比鲜明，常用于免疫荧光组织化学双重染色。4、花青类染料常用的有Cy3、Cy5等，能与细胞内蛋白质结合。这类染料的荧光特性与传统荧光素类似，但水溶性和对光稳定性较强，荧光量子产率较高，对pH等环境不敏感。常用于多重染色。5、乙酸甲酯其本身不发荧光，但透膜进入细胞质后，在酯酶的作用下转变为具有荧光特性的乙酸甲酯。其激发光谱有pH依赖性，是使用**多的细胞内pH荧光指示剂。比较大激发光波长为505nm，比较大发射光波长为530nm，呈绿色荧光。
是分泌性蛋白检测优先方法之一。下面介绍下免疫组化方法的具体实验流程步骤。实验流程简介一、SP三步法1）石蜡切片，常规脱蜡至水。2)（无色液体）孵育10-30分钟，以灭活内源性过氧化物酶活性。3）蒸馏水冲洗，PBS浸泡5分钟4）候选步骤：采用抗原修复：微波（建议30分钟内4次中火）、高压、酶修复方法。自然冷却，再用3分钟×3次.5）血清封闭：室温15-30分钟，尽可能与二抗来源一致。倾去，勿洗。6）滴加适当比例稀释的一抗，37℃孵育2~3小时或4℃过夜（比较好复温）。PBS冲洗，3分钟×5次。7）滴加生物素标记的二抗，室温或37℃孵育30分钟-1h。8)PBS冲洗，3分钟×5次。9）滴加SP（链霉亲和素-过氧化物酶），室温或37℃孵育30分钟-1h。10)PBS冲洗，3分钟×5次。11）显色剂显色（DAB等）。12）自来水充分冲洗。13）可进行复染，脱水，透明。14）选择适当的封片剂封片。二、即用型二步法1）脱蜡、水化组织切片。2）根据所应用的一抗的特殊要求，对组织切片进行预处理。3)，以阻断内源性过氧化物酶，PBS或TBS冲洗。4）滴加一抗，室温或37℃孵育30~60分钟，或4℃过夜，PBS或TBS浸洗3分钟×5次。5）滴加enhangcer增强剂，37℃30min，PBS或TBS浸洗3分钟×5次。
近年来，随着免疫组织化学技术的发展和各种特异性抗体的出现，使许多疑难**得到了明确诊断。在常规**病理诊断中，5%-10%的病例单靠H.E.染色难以作出明确的形态学诊断。尤其是免疫组化在**诊断和鉴别诊断中的实用价值受到了普遍的认可，其在低分化或未分化**的鉴别诊断时，准确率可达50%-75%。免疫组织化学的临床应用主要包括以下几方面：⑴恶性**的诊断与鉴别诊断；⑵确定转移性恶性**的原发部位；⑶对某类**进行进一步的病理分型；⑷软组织**的zhiliao一般需根据正确的组织学分类，因其种类多、组织形态相像，有时难以区分其组织来源，应用多种标志进行免疫组化研究对软组织**的诊断是不可缺少的；⑸发现微小转移灶，有助于临床zhiliao方案的确定，包括手术范围的确定。⑹为临床提供zhiliao方案的选择。天津四色免疫组化技术服务
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使许多疑难**得到了明确诊断。在常规**病理诊断中，5%-10%的病例单靠。尤其是免疫组化在**诊断和鉴别诊断中的实用价值受到了普遍的认可，其在低分化或未分化**的鉴别诊断时，准确率可达50%-75%。免疫组织化学的临床应用主要包括以下几方面：⑴恶性**的诊断与鉴别诊断；⑵确定转移性恶性**的原发部位；⑶对某类**进行进一步的病理分型；⑷软组织**的***一般需根据正确的组织学分类，因其种类多、组织形态相像，有时难以区分其组织来源，应用多种标志进行免疫组化研究对软组织**的诊断是不可缺少的；⑸发现微小转移灶，有助于临床***方案的确定，包括手术范围的确定。⑹为临床提供***方案的选择。免疫组化免疫组化镜检在镜检前可以通过相关资料查询抗体的表达部位：细胞间质、细胞膜、细胞浆、核膜、细胞核以及在其中的多个部位表达（如：MPO抗体表达在细胞膜、细胞浆、核膜、细胞核上）和表达组织（如：VWF抗体在血管壁上表达，呈现环形）。在显微镜下观察时，先在4倍镜下查找组织及其范围，然后查看整个组织确定阳性产物的表达部位，然后将阳性产物表达部位置于视野正**，换高倍镜观察。天津四色免疫组化技术服务
上海朝瑞生物科技有限公司成立于2003-01-22，专业1.发布科研技术 2.发布应用技术 3.发布专业专长 4.发布科研成果 5.发布我的需求 6.发布筛选检验检测服务 7.发布协同代研发服务 8.发布升级改造产品服务 9.发布实验室及仪器设备共享 10.发布培训基地共享 11.发布工厂代加工及共享车间 12.发布科研/项目团队招聘13.发布研究生婚恋 14.发布项目整包服务 15.发布资源交换业务等多项业务，主营业务涵盖[ "科研技术服务", "应用技术服务", "科研成果转化", "科学产品销售" ]。公司目前拥有高技术人才5~10人人，以不断增强企业核心竞争力，加快企业技术创新，实现稳健生产经营。上海朝瑞生物科技有限公司主营业务涵盖[ "科研技术服务", "应用技术服务", "科研成果转化", "科学产品销售" ]，坚持“质量***、质量服务、顾客满意”的质量方针，赢得广大客户的支持和信赖。公司凭着雄厚的技术力量、饱满的工作态度、扎实的工作作风、良好的职业道德，树立了优良的[ "科研技术服务", "应用技术服务", "科研成果转化", "科学产品销售" ]形象，赢得了社会各界的信任和认可。
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