上海多靶点免疫组化技术服务 **** 上海朝瑞生物科技供应

【多色免疫组化染色样本要求】1福尔马林固定的蜡块或玻片，大块组织或TMA都可以，封蜡不能有明显的破损。2玻片样本，组织需要紧贴玻片，上海多靶点免疫组化技术服务，避免褶皱，玻片不能有破损、划伤或污渍。3组织**小应包含大于1000个细胞。4蜡块需包埋实体瘤组织，坏死瘤组织、细针穿刺物、细胞甩片样品会影响染色效果，上海多靶点免疫组化技术服务。5组织应当用10%中性福尔马林固定，正常固定时间为18～24小时。6切片厚度为4μm左右，使用防脱玻片。建议玻片在固定后一周内制备为佳。7不要在水浴捞片环节添加任何粘合剂，样本应置于玻片正面、**。将捞片竖直置于吸水纸上去除水分，轻敲去除水滴，不要用纸擦拭玻片。8玻片置于45°C热盘上放置30min（自然风干玻片时长不小于1小时）。【设备耗材】1检验所需设备器材：荧光显微镜，上海多靶点免疫组化技术服务、通风橱、移液器、恒温干燥箱、微波炉、计时器2检测所需耗材器皿：免疫组化笔、微波修复杯、染色缸、孵育湿盒、盖玻片、洗瓶、量筒100ml、量筒1000ml等【试剂制备】1通用试剂：DMSO、miejun去离子水、二甲苯、乙醇（全部、95%、70%）、10%中性福尔马林、抗原修复液（推荐使用佰诺全景酸性或碱性抗原修复液）、一抗封闭液等。上海多靶点免疫组化技术服务

    抗体和抗原之间的结合具有高度的特异性，免疫组织化学正是利用了这一原理。先将组织或细胞中的某种化学物质提取出来，以此作为抗原或半抗原，通过免疫动物后获得特异性的抗体，再以此抗体去探测组织或细胞中的同类的抗原物质。由于抗原与抗体的复合物是无色的，因此还必须借助于组织化学的方法将抗原抗体结合的部位显示出来，以其达到对组织或细胞中的未知抗原进行定性，定位或定量的研究。免疫组织化学技术按照标记物的种类可分为免疫荧光法、免疫酶法、免疫铁蛋白法、免疫金法及放射免疫自显影法等。这些常用免疫组织化学方法的原理如下：免疫荧光细胞化学技术将已知抗体标上荧光素,以此作为探针检查细胞或组织内的相应抗原,在荧光显微镜下观察.当抗原抗体复合物中的荧光素受激发光的照射后会发出一定波长的荧光。 天津多色荧光免疫组化分析服务

    ·免疫动物时，将弗氏佐剂与抗原按体积1:1混合乳化后(油包水)注入动物。–一般***注射时用完全佐剂乳化，第二次或第三次注射时用不完全佐剂或不用佐剂。佐剂与抗原乳化的方法·研磨法：适于制备大量的佐剂抗原–先将不完全佐剂加热，取；缓缓滴入，边滴边按同一方向研磨，使菌体完全分散。–按同样方法滴人抗原，每加一滴应研磨至小滴消失。滴加抗原的速度要慢，待抗原全部加人后，应成为乳白色粘稠的油包水乳剂。·缺点：研钵壁上粘附大量乳剂，抗原损失较大，对微量或难得抗原不宜采用。佐剂与抗原乳化的方法(续)·注射器混合法–将等量的完全佐剂和抗原分别吸人两个5ml注射器内，然后插入三通管内，交替推动针管混匀，往复操作直至形成粘稠的乳剂为止。·优点：无菌操作，节省抗原或佐剂。·缺点：不易乳化，时间长。佐剂与抗原乳化的方法(续)·快速乳化法：利用超声波粉碎器可快速乳化抗原和佐剂混合物。–将抗原和佐剂按所需量加入一离心管中，置于超声波粉碎器上，粉碎头浸入液面下，离瓶底，以免打碎离心管。–每次乳化10～15s，然后置冰箱lmin左右。反复乳化3～4次即可完全乳化。管内残余量800r/min离心5～10min收集。·优点：简单、快速、节省材料。

多重荧光免疫组化与显色法多重免疫组化不同，多重荧光免疫组化（mIHC）是基于酪胺信号放大（ Tyramide Signal Amplification，TSA）技术，可实现在同一组织切片样本上对多个靶标进行区别标记，进而分析组织微环境中蕴含的复杂信息。 多靶标组织原位的定位，半定量分析，数据更有价值高清共染图片，助力高水平文章发表大幅提升低丰度蛋白的检出几率节省抗体用量，节约宝贵时间同一来源种属抗体的多重标记，无需更换经典克隆节约珍贵样本，小切片提供大信息。

多重荧光免疫组化染色技术

免疫组化染色是一种研究组织形态和原位蛋白表达的常见技术，随着免疫zhiliao的崛起，越来越多**微环境种的标志物被发现与疾病zhiliao、进展密切相关，对这些标志物进行同时染色标记、并研究它们之间的共定位、表达量和距离关系成为肿瘤免疫研究的普遍需求。

酪氨信号放大技术原理

类似常规免疫组化的DAB显色法，TSA（Tyramide signal amplification）技术同样采用HRP标记的二抗，HRP催化加入体系的荧光素底物，生成活化荧光底物，活化底物可与抗原上的酪氨酸共价结合，使样品上稳定地共价结合荧光素。之后用热修复洗去非共价结合的抗体，再换下一种一抗来第二轮孵育，换另一种荧光素底物，如此往复就可实现多重标记。

天津多色荧光免疫组化分析服务

上海多靶点免疫组化技术服务

免疫组织化学是一项在医学基础与临床科研中被广泛应用的一项技术，免疫组化染色服务也是生物公司的一项常规服务之一。该技术融合了抗原和抗体特异性结合的免疫学技术与组织学技术，通过化学反应使标记抗体的显色剂显色，来对组织或细胞内抗原进行定位和定量研究。肽类、***、神经递质、细胞因子、受体、表面抗原等，它们的组织细胞内具有抗原性的物质，所以均可以用免疫组织化学方法显示。免疫组化常用的显色剂包括荧光素、酶、生物素和铁蛋白等。11、金属离子和金属蛋白复合物

金属离子和金属蛋白复合物如铁蛋白、金和汞可以作为免疫组化反应中的标记物。如铁蛋白等，主要应用于免疫电镜。免疫金银法的基本原理是用特异性抗体与抗原反应，随后用金标记的间接抗体或SPA蛋白，再与特异性抗体结合，用乳酸银处理，使银颗粒沉积在金颗粒上，还原银反应而显示出黑褐色。适用于石蜡切片、冰冻切片，培养细胞，细胞涂片和树脂包埋的电镜切片。这种方法敏感性高，可检测组织中微量抗原，定位准确、无扩散现象且背景清洗，对比度好、方法简便。 上海多靶点免疫组化技术服务

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