[VIP第1年] 指数:3
HSAS4，规格：>5×100000cells/瓶Cs-(004)-006833大长舌菓蝠肺细胞；DBL1，规格：>5×100000cells/瓶Cs-(004)-006834恒河猴肺细胞；RM-L1，规格：>5×100000cells/瓶Cs-(004)-006835小鼠肺成纤维细胞；WML2，规格：>5×100000cells/瓶Cs-(004)-006836小鼠胚胎细胞；BABL/C-E，规格：>5×100000cells/瓶Cs-(004)-006837大长舌菓蝠肌肉细胞；DBM1，规格：>5×100000cells/瓶Cs-(004)-006838豚鼠肺细胞；GP-F1，规格：>5×100000cells/瓶Cs-(004)-006839豚鼠皮肤细胞；GP-S1，规格：>5×100000cells/瓶Cs-(004)-006840豚鼠皮肤细胞；GP-S2，规格：>5×100000cells/瓶Cs-(004)-006841豚鼠心肌细胞；GP-H1，规格：>5×100000cells/瓶Cs-(004)-006842豚鼠皮肤细胞；GP-S3，规格：>5×100000cells/瓶Cs-(004)-006843叙利亚仓鼠肌肉细胞；GH-M1，规格：>5×100000cells/瓶Cs-(004)-006844叙利亚仓鼠皮肤细胞；GH-S1，北京*基因法细胞永生化技术服务，规格：>5×100000cells/瓶Cs-(004)-006845大鼠肺细胞；WTRL1，北京*基因法细胞永生化技术服务，规格：>5×100000cells/瓶Cs-(004)-006846小耳猪肺细胞；SEP-L1，北京*基因法细胞永生化技术服务，规格：>5×100000cells/瓶Cs-(004)-006847小耳猪肺细胞；SEP-L2，规格：>。北京*基因法细胞永生化技术服务
很容易使细胞转化为肿瘤细胞。02端粒酶***端粒酶是一种能延长端粒末端的核糖**白酶，由RNA和蛋白质组成。端粒酶能以自身的RNA为模板，从端粒DNA3’-OH末端延伸端粒或合成新的端粒DNA，以补偿细胞分裂时染色体末端的缩短，从而维持端粒的长度，使细胞不会因端粒耗尽而出现凋亡。正常情况下，大多数体细胞端粒酶的表达是严格调控的，表达是瞬时和低水平的。在原代培养的细胞中稳定表达人端粒酶催化亚基(hTERT)基因能稳定端粒的长度，使细胞易于永生化，因此hTERT的***是细胞永生化的重要步骤。虽然***端粒酶活性能够使多种人和动物的细胞永生化，但是对于有些细胞，重建端粒酶活性并不足以使细胞永生化，还需要借助*基因法。03*基因法一些原*基因，如Myc,c-Jun,c-Ias,vsrc和Mdm2，通过基因转染可介导目的细胞永生化。c-Myc是**早被发现的原*基因，有许多与瘤化相关的功能区域，其转录表达的蛋白通过核膜进入细胞核与端粒酶的启动子结合位点特异性结合，诱导端粒酶mRNA快速表达，直接***端粒酶活性，促进细胞进入永生化。细胞永生化过程中，抑*基因如p53,pRb,BRCA1,DPC4等，通过等位基因隐性作用、抑*基因的显性负作用等逐渐失去活性，细胞老化途径受阻。上海EBV法细胞永生化
二、 建株方法
1、 取外周血3-4ml，肝素抗凝（血液室温可放置48小时），应用液浓度5u/ml，可加入5-10ml外周血。
2、 将血液与等量1640培养液混匀后，沿管壁渐渐加入到含有4ml淋巴细胞分离液的离心管中（混合血：淋巴细胞分离液=6：4），3000转离心10分钟。
3、 吸取白细胞层，移入另一支离心管中，加入不含血清的1640培养液6ml，轻轻混匀，进行***次洗涤。1500转离心15分钟。
4、 弃上清液，再加6ml1640全培养液进行第二次洗涤，离心1500转15分钟。
5、 弃上清液，加入2ml1640全培养基（全培养基加入前，置37度水浴10分钟），然后加入环胞霉素A（4%）和1.2mlEBV液/份，充分混匀后移入到25平方厘米的培养瓶，置37度，5%CO2培养箱中。
6、 每2-3天加入3ml新鲜配制的培养基（1.6% 1M HEPES 缓冲液；15%胎牛血清（FBS）；1%青霉素和链霉素；PRMI 1640补足到**）。7天左右镜下观察，可见淋巴细胞明显增大，出现聚集现象。
一、 试剂
1、 淋巴细胞分离液：避光4度保存，用前在37度水浴中加温。整个分离过程中，温度应控制在8-28度，温度过高或过低均影响分离质量。
2、 全培养基（用前配置）：RPM1640培养基，内含20%胎牛血清（Gibco）{56℃灭活30分钟}，1.6-1.8% 1M的HEPES，1.2% 0.2mol/L谷氨酰胺，1%青霉素和链霉素。
3、 环胞酶素A（CyA）：5ml(250mg)/瓶，用1640培养基稀释成0.2mg/ml，使用时终浓度为2ug/ml(0.5%)。
4、 EBV液购自中国科学院遗传所，储存于零下80度。使用时从冰箱中取出，37度迅速融化，用0.22um的滤膜过滤，不要超过0.5-1小时。
B细胞永生化是一个历久弥新的研究课题,如何维持B细胞体外连续传代增殖并表达抗体的特性,对于研制***和诊断用抗体类***和制品具有重要的意义。B细胞永生化的方法包括杂交瘤技术,EB***或SV40***永生化以及遗传修饰法。永生化B细胞能快速有效的产生单克隆抗体,这种抗体能克服异源抗体产生的免疫排斥,是制备单克隆抗体的理想来源,成为研制***性单抗的重要方法。本文主要概述了B细胞永生化方法的研究进展与未来的发展方向,以供从事这方面研究的人员参考。北京细胞永生化
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这并不令人吃惊虽然大多数**似乎需要端粒酶变得永生化，但已知只有约10％至20％的**在端粒酶基因上游的启动子中发生单核苷酸变化。然而，这包括大约70％的黑色素瘤和50％的肝和膀胱*。Hockemeyer说，用来支持这种TERT启动子突变上调端粒酶表达的理论的证据一直是自相矛盾的：*细胞往往具有较短端粒的染色体，但具有更高水平的端粒酶，这种高水平应当会产生更长的端粒。根据这些新的发现，端粒在*前细胞（precancerouscell）中比较短，这是因为端粒酶刚好足以维持而不延长端粒。Hockemeyer说，“我们的论文调和了关于携带这种突变的**的相互矛盾的信息。”该发现还解决了另外一个**近的违反直觉的发现：具有更短端粒的人更能抵抗黑色素瘤。他说，其中的原因在于如果一种TERT启动子突变会促进*前病灶（痣）向黑色素瘤转化，那么在具有更短端粒的人中，在细胞上调表达端粒酶和让它们变得永生化之前，这些细胞将会死掉。该研究还涉及对由人多能性干细胞分化的细胞进行基因改造，使之携带TERT启动子突变，随后追踪它们变得永生化的进展过程。这些结果与从加州大学旧金山分校海伦迪勒家族综合**中心的患者体内获得的人皮肤病灶样品中观察到的进展过程是相同的。北京*基因法细胞永生化技术服务
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