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    收藏查看我的收藏0有用+1已投票0免疫组化编辑锁定讨论免疫组化，是应用免疫学基本原理——抗原抗体反应，即抗原与抗体特异性结合的原理，通过化学反应使标记抗体的显色剂（荧光素、酶、金属离子、同位素）显色来确定组织细胞内抗原（多肽和蛋白质），对其进行定位、定性及相对定量的研究，北京多色荧光免疫组化染色服务，称为免疫组织化学技术(immunohistochemistry)或免疫细胞化学技术(immunocytochemistry)。中文名免疫组化外文名immunocytochemistry应用免疫学基本原理称为免疫组织化学技术目录1基本原理2分类3作用▪标本▪抗体▪常用染色方法4操作步骤▪操作步骤▪化染色步骤5判定分析6意义▪免疫组化镜检▪细胞凋亡检测▪关于掉片7经验总结▪实验为例▪免疫个人感悟免疫组化基本原理编辑抗体和抗原之间的结合具有高度的特异性，免疫组织化学正是利用了这一原理。先将组织或细胞中的某种化学物质提取出来，以此作为抗原或半抗原，通过免疫动物后获得特异性的抗体，再以此抗体去探测组织或细胞中的同类的抗原物质，北京多色荧光免疫组化染色服务。由于抗原与抗体的复合物是无色的，北京多色荧光免疫组化染色服务，因此还必须借助于组织化学的方法将抗原抗体结合的部位显示出来，以其达到对组织或细胞中的未知抗原进行定性，定位或定量的研究。北京多色荧光免疫组化染色服务

    而高离子强度则有利于分解）11)DAB显色背景的深浅和特异性染色的深浅均可以由DAB孵育条件决定。DAB显色时间不是固定的，主要由显微镜下控制显色时间，到出现特异性染色较强而本底着色较浅时即可冲洗；DAB显色时间很短（如几秒或几十秒）就出现很深的棕褐色，这很可能说明你的抗体浓度过高或抗体孵育时间过长，需要下调抗体浓度或缩短你的抗体孵育时间；此外，若很短时间就出现背景很深，还有可能你前面的封闭非特异性蛋白不全，需要延长封闭时间；DAB显色时间很长（如超过十几分钟）才出现阳性染色，一方面可能说明你的抗体浓度过低或孵育时间过短（比较好一抗4℃过夜）；另一方面就是封闭时间过长。12）复染目的是形成细胞轮廓，从而更好地对目标蛋白进行定位，经常用苏木素复染（胞核染料）。注意苏木素复染时间要看当时的室温、溶液的新旧、目标抗原的定位等情况，一般数秒-数分钟，胞浆蛋白可以适当时间长一点，而胞**白则要短。不过这个如果染色不理想可以补救的。方法是：染色深则分化时间稍长些即可；染色浅则再置于苏木素中染色即可。盐酸酒精是分化，氨水是返兰。作用不同。片子复染完后流水振洗，然后置于盐酸酒精中数秒（一定动作要快）后拿出流水振洗。江苏多标记免疫组化技术服务

    80年代到90年代相继又有新的荧光素出现如R-藻红朊、B-藻红朊、C-藻青蛋白、cy2、cy3、cy5和cy7等均在流式细胞仪和激光共聚焦显微镜中广泛应用。由于免疫荧光组织化学的特异性，快速性和在细胞水平定位的准确性，已在免疫学、微生物学、病理学、**学以及临床检验等许多方面得到广泛应用，日益发挥重要作用。[1]免疫组织化学技术现状与展望编辑免疫荧光组织化学技术经过半个多世纪的不断改进和创新，已成为现代研究生物和医学的重要手段之一。由于免疫荧光技术与形态、机能相结合不断完善和发展，尤其是合成了多种新荧光素与抗体容易结合，且结合物稳定。可以和FITC结合进行免疫荧光组织化学双标记或三标记。至今，它已和亲合化学技术如SPA、Biotin以及avidin、ConA相结合，应用领域也日益扩大，又与现代的电子计算机、扫描电镜技术、共聚焦显微镜、荧光***细胞分类器（FACS）以及数码相机摄影技术的应用，使得快速性、简便性有了更大的提高，使得定量更加准确。90年代又开展了荧光原位末端标记和荧光原位杂交技术，使得应用范围更广。虽然免疫组织化学技术有了很大的发展，如免疫金银法、免疫胶体金法、SP、Evision二步法和CSA法，但由于它有自己独特的优点：特异性强。

多重荧光免疫组化与显色法多重免疫组化不同，多重荧光免疫组化（mIHC）是基于酪胺信号放大（ Tyramide Signal Amplification，TSA）技术，可实现在同一组织切片样本上对多个靶标进行区别标记，进而分析组织微环境中蕴含的复杂信息。 多靶标组织原位的定位，半定量分析，数据更有价值高清共染图片，助力高水平文章发表大幅提升低丰度蛋白的检出几率节省抗体用量，节约宝贵时间同一来源种属抗体的多重标记，无需更换经典克隆节约珍贵样本，小切片提供大信息。

    如淋巴细胞表面抗原尤其适合。·组织冻结过程中，细胞内、外的水分会形成冰晶，冻结的速度愈慢，冰晶颗粒愈大，可严重影响组织、细胞的形态结构。因此制备冻块时要求低温、速冻。1、冰冻组织块的常用方法·液氮中冰冻：组织投入液氮中(一196C)中10～20sec；·干冰中加入**(或异戊烷)，液体立即气化起泡，温度降至一70C，将组织投入，若在干冰**中置一盛有异戊烷的容器，组织投入该容器内结冻则更好；–上述组织在速冻时应浸埋于OCT包埋剂或甲基纤维素糊状液内，以保护组织。–制成冻块后若需保存，应以铝箔或塑料薄膜封包，贮存于-70C冰箱。2、切片·供免疫组化用的冰冻切片同样要求附贴平整，并有连续性。·载玻片也应清洁无油污，但一般无需涂抹粘附剂；·切片时，使用恒温冷冻切片机，在箱内温度-25C。切片厚度一般为4～8m。3、切片后处理·切好的冰冻切片，室温下自然晾干1～2h后，入4C**固定10min，待干燥后作免疫组化染色或封存于-20℃。·冰冻切片由于切片技术要求较高，不易得到连续性很好的切片，其形态结构亦不如石蜡片，且冻块和切片不便于长期贮存，因此冰冻切片的应用受限。北京多色荧光免疫组化染色服务

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    因而它是大多数免疫组化中优先的组织标本制作方法。1、取材的特殊要求及注意事项·标本新鲜：一般在2h以内进行，超过2h，组织将有不同程度的自溶，其抗原或变性消失，或严重弥散。·取材部位：除取病灶或含待检抗原部位外，还应取病灶与正常交界处，即所取组织切片中同时应有抗原阳性和阴性区，以形成自身对照。–细胞坏死后，不仅抗原弥散或消失，而且常引起非特异着色，干扰观察，因此取材时应尽可能避开坏死区。1、取材的特殊要求及注意事项(续)·避免挤压：取材时组织受挤压可使边缘部细胞形态改变并加深非特异着色，因而取材时应使用锋利的刀刃；–镊取组织动作要轻；–经窥镜直接钳取的组织往往有过度挤压，观察结果时应有所考虑。2、固定及常用的固定液·取材后的组织需立刻投于固定剂中–固定使组织和细胞的蛋白质凝固，终止内源性或外源性酶反应，防止组织自溶或异溶，以保持原有结构和形态；–对免疫组化而言更有原位保存抗原的作用，避免抗原失活或弥散。·常用固定液：固定剂品种很多，但大多属于醛类和醇类。其固定原理不同，各有优缺点。–醛类（常用甲醛、戊二醛和多聚甲醛）–醇类（常用乙醇）–其它（**）(1)醛类·甲醛。北京多色荧光免疫组化染色服务

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