数字PCR由于检测时完全不依赖传统的Ct值即可实现真正意义上的精确定量,因而可以提供比实时荧光定量PCR更精确的基因差异表达研究,尤其对于那些靶基因表达差异微小的情况,如:mRNA、microRNA、lncRNAs等的表达分析;等位基因的不平衡表达;单细胞基因表达分析;外泌体核酸分子定量分析等。数字PCR微滴化的样品处理及检测,上海高灵敏数字PCR,这种摆脱Ct值的计算方法而直接获取目标基因的精确拷贝数,为拷贝数变异的研究提供了精确的检测精度,上海高灵敏数字PCR,上海高灵敏数字PCR。是其他诸如二代测序、芯片杂交等平台无法达到的。采用数字PCR能够有效对二代测序(NGS)和微阵列比较基因组杂交(aCGH)等实验结果进行验证,并具有检测周期短、成本低、样本通量高等特点可用于拷贝数变异(CNV)研究。 DNA聚合酶依赖的酶促合成反应,扩增的特异性取决于引物与模板DNA的特异结合。上海高灵敏数字PCR
常用体液来源(如血液,胸腹水,唾液及尿液等)的待检标本中的DNA,有正常脱落体细胞和病变脱落细胞两种来源,前者的量远大于后者。通过数字PCR微液滴处理能在每个微液滴中有效减少正常体细胞DNA的干扰,实现**标记物的有效检测,如EGFR,ALK,ROS1,KRAS、BRAF等基因的突变检测、乳腺*/胃*的HER2基因扩增检测等,应用于**精确医学的伴随诊断。使用数字PCR技术对患者过程中的循环**DNA(ctDNA)进行检测,实时监控疾病进展。在非小细胞肺*、乳腺*和肠*等多种**患者中都取得了令人鼓舞的结果。与影像学及其他常规指标相比,ctDNA突变及丰度改变通常会提前数月出现,这样就可以提醒医生及时调整医疗方案,使患者得到更有效的改善。 上海微滴式数字PCR服务根据相对比例和反应器的体积,就可以推算出原始溶液的核酸浓度。
拷贝数分析基因拷贝数变异(Copy number variations,CNVs)是指人类基因组中存在的,较之于参照基因组DNA片段缺失或复制大于1kb到Mb的亚微观结构变异,CNVs本身蕴含着丰富的遗传信息,对于研究基因变异在生物进化及疾病进程等领域具有重要意义。相较于现有的CNVs研究技术(定量PCR、高密度寡核苷酸芯片high
density oligo nucleotide array,FISH,比较基因组芯片microarray
based comparative genomic hybridization,array-CGH,测序等),数字PCR在灵敏度和分辨率方面更具优势,尤其适用于更高拷贝数分析,确定确切的拷贝数,检测精度超过±10%。
定量PCR是依靠标准曲线或参照基因来测定核酸量,而数字PCR则让你能够直接数出DNA分子的个数,是对起始样品的***定量。因此特别适用于依靠Ct值不能很好分辨的应用领域:拷贝数变异、突变检测、基因相对表达研究(如等位基因不平衡表达)、二代测序结果验证、miRNA表达分析、单细胞基因表达分析等。
数字PCR技术不断发展,Bio-Rad、LIFE Technologies及RainDance等厂家相继推出技术较为成熟的数字PCR产品。QuantaLife公司开发出的微滴数字PCR技术。该产品还获得了2011年度Frost & Sullivan北美新产品创新奖。2011年10月,Bio-Rad公司收购了QuantaLife和ddPCR技术,相继推出了QX100、QX200微滴式数字PCR系统。 每个单元至少包含一个拷贝的目标分子( DNA 模板) ,在每个反应单元中分别对目标分子进行PCR 扩增。
无创产前检查
镰状细胞贫血(sickle cell anemia)是HBB基因突变引起的常染色体显性遗传病,有严重的危害,可以导致高达5%的胎儿死亡率及4.62%的孕妇死亡率。而精细有效的无创产前诊断是预防镰状细胞贫血患儿出生的有效方法。研究人员采用dPCR技术检测孕妇胎儿游离DNA(cff-DNA)HBB基因突变。结果显示,dPCR技术能够确定87%的男性胎儿(n=45)和75%的女性胎儿(n=20)HBB基因的突变状态。当cff-DNA浓度大于7%时,可以**的检测出HBB基因突变[3],可以说是相当厉害了。 了解生物科学的理论前沿、应用前景和***发展动态。上海高灵敏数字PCR
这两个方向的主要区别个人认为是生物技术更偏重于科研,生物工程更加偏向于生产。上海高灵敏数字PCR
数字PCR即Digital PCR(dPCR),它是是一种核酸分子精细定量技术。相较于qPCR,数字PCR可让你能够直接数出DNA分子的个数,是对起始样品的精细定量。数字PCR实际上是一个在模板DNA、引物(模板片段两端的已知序列)和四种脱氧核苷酸等存在的情况下,DNA聚合酶依赖的酶促合成反应,扩增的特异性取决于引物与模板DNA的特异结合。病原体检测精确地对靶 DNA 或 RNA 分子中的细微变化进行定量分析,从而检测和监测病原体。 无需使用标准曲线,直接对 NGS 库执行精细定量分析。 上海高灵敏数字PCR
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